细胞名称:猪原代肺上皮细胞
细胞来源:源于新生西藏小型猪肺组织
组织特点:样本组织块基本呈暗红色,质软,易剪碎,血细胞多
分离试剂盒:IMT-K3(IMMORTECH)
培养试剂盒:IMT-K1-(IMMORTEHCH)
组织分离步骤▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼手术切除的组织应立即置于SolutionA中→无水乙醇洗一次(≤3s)→SolutionB洗两次→剪碎→加入10mLSolutionC,37℃,1.6h→离心,rpm,8min→去上清,5mLSolutionD重悬,37℃,10min→加入10mLSolutionE重悬过滤→离心,rpm,10min→去上清,加入5mLSolutionB,重悬→离心,rpm,5min→去上清,IMT-K1-培养基重悬,铺至T25培养瓶。(详尽步骤请参考IMMORTECH-IMT-K3原代细胞分离培养试剂盒说明书)。▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲组织分离要点
该组织血细胞较多,可在过SolutionB时用镊子轻压组织去除部分血细胞;组织块软,剪碎操作上难度较小,其剪碎程度直接影响最终获取细胞量的多少,故尽可能剪碎至糊状;该肺组织消化时间为3h,期间晃动数次避免堆聚以保证组织与SolutionC接触充分;组织消化终止后比较粘稠,较难过筛,可适当替换细胞筛。
细胞形态:细胞多呈扁平多边形,镶嵌排列呈铺路状,细胞结合紧密,细胞间质少,生长分裂旺盛。细胞特性:原代培养,持续传代。细胞培养要点:该细胞增殖速度稳定,细胞传代消化时间为4-5min,传代密度为2X个/cm2,培养4-5d后细胞融合度可达80%或以上。细胞图片
P12d
P64d
细胞潜在用途
(1)机械屏障作用,进行肺上皮细胞通透性测定、机械损伤研究等具有很高的临床意义。
(2)作为病原体的重要识别系统,启动开始的宿主免疫反应。肺部上皮细胞作为病原体的重要识别系统,含有跨膜和细胞内病原-传感模式识别受体,上皮细胞检测入侵的病原;复杂的信号结果在上皮细胞中激活,随即激活随后的先天性和适应性免疫应答。
(3)猪肺原代上皮细胞与主要病理生理疾病有关,建立肺上皮细胞体外实验模型在研究细胞的正常功能、疾病发病机理、组织器官功能重建或再造、测定药物对正常细胞的毒性以及吸入毒理学或环境毒理学研究中具有重要意义。
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