吹呀~吹呀~我的骄傲放纵。。。。近三周广东地区遭遇台风“三连杀”。“天鸽”妈妈离家出走来到广东,“帕卡”爸爸来广东寻妻,“玛娃”女儿担心爸爸妈妈也到访广东。由于二胎政策放开,目前新出生的“古超”儿子也准备启程广东寻亲。。。。
我会变成巨人,踏着力气,踩着梦!
下面让我们开启这一期的“细说细胞”吧~~~
细胞名称:小鼠原代胃上皮细胞
组织来源:C57小鼠
组织特点:样品有韧性,易剪碎
分离试剂盒:IMT-K3(IMMORTECH)
培养试剂盒:IMT-K1-(IMMORTECH)
组织立即置于SolutionA中,4℃保存→75%酒精消毒管壁,传递到无菌生物安全柜→无菌镊子取出组织→无水乙醇洗一次(≤3s)→SolutionB洗两次→转移至无菌培养皿中→眼科剪剪碎至1-2mm3(剪碎的过程中,如果有些干,可以加一些SolutionB)→加入10mLSolutionC,37℃,2h10min→离心,rpm,8min→去上清,加入5mLSolutionD重悬,37℃,10min(5min的时候轻微震荡一次)→加入10mLSolutionE重悬,70μm细胞筛过滤(试剂盒中自带)→收集滤液离心,rpm,10min→去上清,加入5mLSolutionB,重悬→离心,rpm,5min→去上清,IMT-CBM-培养基重悬,铺至T25培养瓶进行培养。(详尽步骤请参考原代细胞分离培养试剂盒说明书(IMT-K3),原代细胞持续培养方法详见小鼠原代胃上皮细胞培养试剂盒说明书(IMT-K1-)。
组织分离要点
由于该组织属于正常组织,并且刚刚分离出来就处理,所以质地很有韧性,易处理。同时剪碎程度直接影响消化酶的消化时间及获取细胞量的大小,故尽可能剪碎至糊状,大小均一;该小鼠胃组织消化时间为2h,期间每1h晃动一次,避免组织堆聚确保组织与SolutionC接触充分。
细胞培养要点1细胞形态:典型上皮细胞样,细胞边缘较亮,呈铺路石状,细胞间紧密排列。
2细胞特性:原代细胞,持续传代,快速增殖。
3细胞培养要点:该细胞增前期殖速度较慢,分离41h发现克隆。后期增殖速度很快,细胞形态很稳定。细胞传代消化时间3min,传代密度5X个/mL,培养2-3d后细胞融合度可达80%或以上。
细胞图片展示P1d4
P5d20
细胞潜在用途▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼1.利用IMMORTECH产品体外分离培养的小鼠原代胃上皮细胞,可作为研究药物安全性评价的必要生物学模型;
2.提供小鼠原代胃上皮细胞,更有助于抗癌新药的前期研发。
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