单线态氧(1O2,Singletoxygen)是活性氧家族的一员,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。
l荧光照片如何分析?
需要有相关的荧光强度分析软件。单线态氧表达水平直接通过荧光信号的强弱和分布范围来体现。
有的显微镜扫描下来的图像本身就可以测面积和强度,可以同时测不同颜色的荧光强度。有的显微镜不支持此功能,可以将荧光染色彩色图像转换为黑白的灰度图,然后再以灰度值作为测量指标进行分析。
要结合明场的照片具体分析。如果细胞分布均匀可以算固定面积荧光强度。成像时中心和四周有差异时,一般将四周剪切掉也可以。如果细胞分布不匀,需要找到细胞分布匀称的视野,一个视野一个视野找。
如果要用图片做结果,就要平行做多个图片,作分析,统计,每张都要求荧光分布尽量一致。
为了去除杂光的影响,可以适当调节统计荧光的强度范围,将信号过弱的背景杂光去除掉。对照组和实验组整张图片需要做同样的处理,保证所有参数均要一致。
对于不同情况荧光强度的统计方法,根据实验需要或参考文献。可以算等面积的平均强度;也可以算阈值高于一定值的平均强度;也可以算荧光的累积而不算平均。要根据课题需要选择合适的测量统计方法。