单链可变区片段(single-chainfragmentvariable，scFv)抗体是目前研究较多、应用较为广泛的重组抗体之一，不包含抗体恒定区，但仍能表现出与抗原
的高亲和力。抗体库技术的出现，进一步推动了工程抗体的发展，特别是体外噬菌体筛选系统，使得抗体生产领域具有诱人的应用前景。
噬菌体作为体外体系，虽然高效，但其与实际作用环境有较大的差异，不能反映真核抗体真实生理水平和维持其真实构象。Fields等和Allen等在对真核基因转录调控进行研究的过程中建立了酵母双杂交。(yeasttwo-hybrid，Y2H)系统，该系统是基于对真核细胞转录因子尤其是酵母转录因子半乳糖应答转录因子4(galactose-responsivetranscriptionfactor4，GAL4)性质的研究，是目前研究蛋白-蛋白相互作用较为简便、灵敏且高效的一种方法。
Y2H系统在筛选与靶蛋白特异作用的诱饵蛋白、治疗靶点的识别和验证、药物靶点的识别、信号转导、细胞周期调控等领域都得到广泛应用，利用Y2H系统筛选免疫检测抗体却未见报道。
Y2H系统的验证及酵母菌株AH表型鉴定
利用载体自带引物对GAL4双杂交系统进行PCＲ扩增验证(图1)，大小分别约为bp(pGBKT7)、bp(pGBKT7-lam)、bp(pGBKT7-53)、bp(pGADT7-T)、bp(pGADT7)，大小与理论值相似，载体正确，可用于后续Y2H系统的构建。
酵母菌株AH在缺少Trp、Leu、Ade、His的SD培养基中不能生长，在缺少Ura、Met的SD培养基和YPDA培养基中能够正常生长，该表型满足实验需求，可用于本实验Y2H的研究。
图1Y2H系统的扩增及验证
p53基因的突变发生在超过50%的人类癌症中，如乳腺癌、肺癌、结直肠癌、肝癌、胃癌、前列腺癌、胰腺癌等多种癌症，同时，p53对能量代谢、糖类代谢都有着重要的影响，因此p53的检测对于临床和研究都具有重要的意义。P53蛋白的检测最主要的方式是通过抗体检测。本研究以抗P53的scFv制备为例，应用Y2H系统在真核细胞酵母内从构建的抗体文库中筛选P53scFv，其产生的抗体有可能保持天然的折叠状态而更接近于体内的真实水平，从而探讨新的抗体制备体系
综上所述，利用酵母双杂交系统可获得抗人P53scFv，且其具有良好的亲和力和组织穿透力，可用于免疫检测，并具有良好的商业化潜力。Y2H系统可作为免疫检测抗体的另一体内筛选系统，为免疫检测抗体的筛选制备提供了一种新的思路。
