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前言
慢病毒是强大的介导外源基因表达的工具，可在体内和体外实现过表达、基因沉默、基因编辑等多种应用，让我们的研究变得更加便利。然而，包装慢病毒似乎对于实验新手来说还比较陌生，甚至不得不选择昂贵的外包实验公司代劳。这篇文章将分为两大部分，先是讲解获得高滴度慢病毒的关键，后是提供一份百试百灵的实验方案（最高可获得10MillionTU/ml慢病毒粗制品，无需进一步纯化即可满足大部分应用），希望对各位的实验有帮助。
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获得高滴度慢病毒的关键
包装细胞
一般地，我们选择T细胞（稳定表达LargeTantigen大T抗原版本）作为包装宿主，而细胞的健康状态是影响病毒产量的最关键因素。
首先，用于慢病毒包装的T细胞的传代数不宜过高。当我们从ATCC或其他正规细胞库（潜台词：不要随便从野鸡公司买，也不要从别的不熟悉的实验室借）购得细胞后，将复苏并培养的那一代记为第1代（暂时不管之前ATCC到底传了多少代）。在扩增培养、冻存及后续复苏使用时，务必记录传代数。在我手里用于包装慢病毒的T，通常都在第6代左右，到第15代包装出来滴度并未有显著下降，但并没有测试过更高的代数。
第二是培养条件。T细胞增殖飞快，营养消耗速率不低，因此保证培养基的养分充足也是个关键因素。通常使用高糖DMEM（含丙酮酸钠版本，多一些碳源）+10%FBS即可满足需求。但是，DMEM中的Glutamine并不稳定，在4℃保存和37℃水浴、培养的条件下会自发降解，因此推荐在上述培养基中添加GlutaMAX。
转染
其实很容易想到，高效率的转染也是保证高滴度的关键。不过在此有必要敲一下黑板：在考虑转染条件时，不光要看转染效率，还得看细胞毒性。事实上，系列的细胞都极易转染，效率随随便便就破90%以上。因此，在包装慢病毒的转染实验中，我们应该更多地去北京看的好白癜风的医院白癜风在线咨询
