国内外诸多文献提到，白桦茸提取物桦褐孔菌醇对多种人类肿瘤均有较强的抗肿瘤作用。那么，它对癌症的影响与机制究竟如何？医院消化内科的专家们进行了相关深入研究，并发表《桦褐孔菌醇对人胃癌BGC－细胞周期的影响及其机制》成果论文在《中国老年学杂志》上。以下为该研究论文的相关摘要↓↓
材料与方法1、材料人胃癌细胞株BGC-购自中科院上海细胞所。桦褐孔菌醇由河南大学药学院赵芬琴博士提取并鉴定。胎牛血清(杭州四季青公司)，RPMI和0.25%胰酶(Gibco，美国)；CyclinA、p21抗体、PCNA(SantaCruz，美国)。2、细胞培养与药物处理胃癌BGC-细胞株生长于含10%胎牛血清的RPMI培养液中，另加青霉素U/ml、链霉素g/ml，置于37℃、5%CO2及饱和湿度为95%的培养箱中培养。待胃癌BGC-细胞生长旺盛，取对数生长期细胞接种细胞于6孔板或25cm2培养瓶中，待细胞长到80%～90%融合度时，吸尽培养液，实验组加入无血清RPMI培养基配制的不同浓度(20、40、80g/ml)桦褐孔菌醇，对照组加入等量不含桦褐孔菌醇的无血清RPMI培养基，共同培养48h，备用。3、光学显微镜检测细胞凋亡细胞爬片，经桦褐孔菌醇80g/ml作用48h后，HE染色常规检测。4、荧光显微镜检测细胞凋亡细胞爬片，经桦褐孔菌醇80g/ml作用48h后，加吖啶橙(AO)/溴乙啶(EB)混合液滴于盖玻片上(避光)，在Olympus荧光显微镜下观察，活细胞(VN)核染色质绿色，呈正常细胞结构。早期凋亡细胞(VA)核染色质绿色，呈固缩状。晚期凋亡细胞(NVA)核染色质橘红色，呈固缩状或破裂状。坏死细胞(NVN)核染色质橘红色，呈正常细胞结构。随机选择3个不同高倍视野(×)，细胞凋亡率(%)=(VA+NVA)/(VN+NVN+VA+NVA)×%。5、免疫细胞化学染色法检测CyclinA、p21、PCNA蛋白的表达终浓度为80g/ml的桦褐孔菌醇作用于胃癌BGC-细胞48h后，在4℃条件下用冷丙酮固定10min，按试剂说明进行SP法免疫细胞化学染色。判定标准：以细胞核、细胞质呈清晰棕黄色为阳性细胞。随机选取10个高倍视野，分别计数阳性细胞百分比。6、统计学方法采用SPSS13.0软件进行t检验。
检测结果1、桦褐孔菌醇诱导BGC-细胞发生凋亡的形态学变化HE染色光镜观察，对照组肿瘤细胞生长旺盛，呈不规则形，细胞核染色均匀，核仁清晰可见，核分裂像多见。实验组肿瘤细胞体积缩小，呈圆形或不规则形，胞质浓缩，核染色质浓缩，有的细胞膜起泡形成凋亡小体(图1)。AO/EB荧光染色荧光显微镜下观察，对照组肿瘤细胞大小形状较单一，核染色质呈绿色或黄绿色均匀荧光，胞质呈橘红色荧光。实验组BGC-胃癌细胞表现为细胞体积变小呈圆形，细胞周围可见亮绿色或黄绿色荧光的圆形凋亡小体，胞核染色质呈绿色或橘红色，胞质内的橘红色或橘黄色荧光减弱或消失。坏死细胞核染色质呈橘红色，胞质膨胀或破裂(图2)。80g/ml桦褐孔菌醇作用BGC-胃癌细胞48h，凋亡率为25%(见表1)。2、桦褐孔菌醇对BGC-细胞CyclinA、PCNA、p21表达的影响80g/ml桦褐孔菌醇作用于BGC-细胞48h后，与对照组相比，细胞周期相关蛋白CyclinA、PCNA蛋白的表达减少和p21蛋白表达增加(P＜0.01，见图3，表2)。
结论分析本研究发现，桦褐孔菌醇作用BGC-细胞48h后，除了对细胞增殖的影响外，在进行HE染色及AO/EB荧光染色中形态学观察发现，桦褐孔菌醇有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。CyclinA是S期细胞周期蛋白，属于正向细胞周期调控蛋白，关键作用是促进DNA合成。PCNA是一种酸性核蛋白，它是DNA聚合酶δ的一个附属蛋白，它能在双链DNA周围形成一个滑动夹板，从而与DNA聚合酶δ相互作用，并使之持续合成DNA，PCNA在细胞周期的S期和G2期数量增高，因此，PCNA是DNA合成中的一个重要调节因子。而p21是细胞周期的负调控因子，能抑制PCNA的活性直接抑制DNA的合成，高表达时可阻断正常细胞周期进程。桦褐孔菌醇可能通过减少CyclinA、PCNA细胞周期蛋白的生成和上调细胞周期负调控因子p21的表达，影响细胞周期，致使产生S期阻滞，进而实现其对人胃癌BGC-细胞的抗癌效应。
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