实验小站慢病毒系列（三）
慢病毒常见问题汇总
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常用术语
病毒感染复数（MOI）：
传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为pfu。
一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfunumber/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值，以下提到的MOI都是沿用这个概念。然而，由于病毒的数量单位有不同的表示方式，从而使MOI产生了不同的含义。能产生细胞裂解效应的病毒例如单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu表示病毒数量，因此其MOI的含义与传统的概念相同。
MOI=病毒滴度×体积/细胞数量
病毒的滴度（BT）：
指单位体积液体中有感染能力的病毒或噬菌体数目。滴度是一个病毒自身复制的数量概念，有很多名词都用来描述病毒溶液的滴度，
1）VP(病毒颗粒)或OPV（光学颗粒单位）
2）GTU（基因转移单位）或转导颗粒（BFU即蓝点形成单位，与GTU类似）
3）PFU（空斑形成单位）
4）TCID50（50%组织培养感染剂量）
慢病毒技术中，病毒颗粒滴度（BT=TU/ml，transducingunits）
计算公式：TU/μl=(P×N/×V)×1/DF，P=%GFP+cells，N=转染时的细胞数，V=每孔加入病毒稀释液体积（μl），DF=稀释因子（dilutionfactor）=1（undiluted)、（diluted1/10）、（diluted1/）
常用慢病毒滴度检测方法
常见问题解答
Q.目前存在许多病毒载体系统，包括：腺病毒、逆转录病毒和慢病毒，针对我的实验应该使用哪个系统?
腺病毒：针对大多数细胞有几乎%的感染效率，包括分裂和不分裂细胞及原代细胞，不整合到宿主细胞。但是构建和包装的操作相对复杂。
逆转录病毒：对于大多数细胞的感染效率30%。而且依赖细胞的分裂。操作人员需要注意的是逆转录病毒会整合到宿主细胞的基因组上，并且有引起基因突变、激活癌基因的风险。与腺病毒不同的是，它的构建及包装要比后者简单很多。
慢病毒：对于分裂细胞和非分裂细胞能够达到30%的感染效率。和逆转录病毒一样存在整合到宿主细胞基因组上的风险，以致引起基因突变、致癌。并且构建和包装相对简单。
目前腺病毒系统是最好的一种对于所有细胞将外源基因及siRNA导入细胞的有效途径。但是，如果是针对个别细胞的研究的话，逆转录病毒、慢病毒甚至直接将带有目的基因的表达质粒转染细胞即可。
Q.病毒是否可以重新冻融？
病毒可以冻融，但是反复多次的冻融会降低病毒的滴度。
Q.如何使用慢病毒感染细胞？
使用慢病毒感染细胞的操作流程取决于细胞种类，因此首先要了解细胞的来源和背景。通常来讲首先要根据准确的MOI和需要感染细胞量计算所需要的病毒量，然后将所需病毒液加入培养体系后4小时左右即可换成完全培养基正常培养。
Q.如何确定慢病毒感染靶细胞的感染效率？
慢病毒感染靶细胞的感染效率可以通过qPCR检测靶细胞中的慢病毒载体拷贝数来测算。另外如果构建的慢病毒载体带有标记基因（如GFP、RFP等）则可以通过FACS检测阳性细胞的比例来评估感染效率。
Q.慢病毒感染靶细胞后，目的基因的表达是瞬时表达还是稳定表达？
慢病毒感染靶细胞后，目的基因或者干扰序列被整合到细胞的染色体DNA；并且随靶细胞的增殖分化，目的基因或者干扰序列也随靶基因DNA的一起复制并遗传到子代细胞中。
Q.是否可以直接从慢病毒颗粒中提取慢病毒载体？
不可以，慢病毒载体用于转染包装细胞后生产病毒，包装好的病毒颗粒只含有载体中5’and3’LTR’s的RNA。
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