慢病毒（Lentivirus）载体是以人类免疫缺陷病毒（HIV）为基础发展起来的基因治疗载体。相比常用的质粒载体，慢病毒载体具有感染谱广泛、感染效率高、长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。
1.慢病毒载体发展历程：
第一代慢病毒载体源于人类缺陷免疫病毒(HIV)，该系统使用三种质粒，包括载体质粒、包装质粒、包膜质粒。载体质粒包含有外源插入片段以及所有相关顺式作用元件(包装信号Ψ，LTRs，RRE和引发结合位点)；包装载体含有除了包膜蛋白编码基因以外的所有全病毒基因组，使用CMV启动基因表达，并用人胰岛素基因的polyA替代3’LTR作为加尾信号。引入水泡口炎病毒的G糖蛋白(VSV-G)来代替HIV-1的包膜蛋白，并将包膜蛋白单独置于一个质粒中表达。
第二代慢病毒载体在第一代的基础上进一步改进，包装质粒去除了HIV辅助基因Vif,Vpr,Vpu和Nef，保留了Tat和Rev基因，以减少重组产生具有复制能力的逆转录病毒(RCR)的风险，最大的优点是对病毒滴度没有影响。
第三代慢病毒载体是自身失活型(SIN)慢病毒载体，载体质粒3’端LTR的U3区启动子发生了失活突变，整合入靶细胞基因组中后，将不会产生完整长度的载体RNA。并去除了对Tat和Rev蛋白因子的依赖作用。通过将5’LTR中的U3区替换成异源启动子（如CMV），可以消除对Tat的依赖；通过对gag-pol编码基因的密码子进行优化，可以解除对Rev的依赖。仁源生物依照多年的经验积累，对现有的载体进行了多种酶切位点、筛选标记、功能元件等的改造，使得目的基因的克隆变得更便利、后期细胞筛选更容易。
2.慢病毒载体包装的流程：
a)将目的基因片段克隆到载体质粒上；
b)将带有目的基因的载体质粒、包装质粒与包膜质粒以一定的比例混合共转入HEK-T细胞中；
c)48小时和72小时后，收集病毒上清；
d)测定病毒滴度，若病毒滴度不足，可通过超速离心浓缩的方法来提高滴度；
e)依据具体实验需求来感染目的细胞；
f)运用药物或流式分选，筛选稳定表达目的基因的细胞株。
仁源生物通过优化载体质粒、包装质粒与包膜质粒的比例，针对病毒包装开发更高效的转染试剂，从而方便获得具有高滴度的慢病毒。
3.慢病毒载体的应用领域：
慢病毒载体主要用于目的基因的过表达，或者通过表达小干扰RNA来对目的基因进行敲减。
近年来使用慢病毒载体载体研究的重点领域包括：
a)肿瘤治疗研究，使用慢病毒载体可特异性地感染肿瘤细胞，对正常细胞的毒性较低；
b)其它疾病的治疗研究，利用慢病毒载体可以稳定表达特定蛋白，可以用于治疗一些缺乏某种生物分子造成的疾病，如帕金森病、Fabry病等等；
c)抗病毒领域的研究，通过慢病毒载体刺激免疫系统，获得针对某些病毒的抗性，例如HIV感染的防治；
d)结合RNAi干扰技术，慢病毒载体可以抑制多种蛋白的表达，从而达到疾病治疗的目的；
e)用于基因编辑，慢病毒载体也作为基因编辑的载体，例如与最新的CRISPR-Cas9技术结合，提高基因打靶的效率。
4.仁源生物慢病毒的制备：插入片段大、病毒滴度高、后续感染细胞成功率高。
仁源生物技术（上海）有限公司（HumangenBiotechInc）是一家高科技生物医药技术企业，由多名留学美国的生物学与医学博士创建，团队人员对慢病毒包装积累了十余年的工作经验，对病毒包装有自己独特的理解。
仁源生物通过一系列对慢病毒系统的优化，形成了一系列的技术特色，主要包括：
a)优化了慢病毒系统的启动子、包装元件以及包装方法，可以获得高滴度的病毒；
b)目的基因片段可达4Kb以上；
c)优化后的慢病毒载体，大大提高了目的基因的转染效，对难以转染的神经细胞、肝细胞、心肌细胞、内皮细胞和干细胞等，也有较好地转染效果；
d)既可以可以感染分裂细胞，也可以感染非分裂细胞；
e)提供多种筛选标记选择。
5.结果实例：
细胞转染
RNA干扰
6.服务提供
过表达病毒载体、小干扰RNA慢病毒载体的构建、包装、病毒滴度测试、稳转细胞系筛选。仁源生物拥有的慢病毒感染系统具有GFP、Puro、G等多种筛选标记，并可依据客户的依据，个性化定制筛选标签。
7.服务周期
从构建载体到病毒滴度测试完成：4-6周
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