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动物细胞培养常用试剂:
Hank’s液,D-Hank`s液,PBS,EDTA,胰蛋白酶,青霉素、链霉素。Hank`s液是常见的平衡盐溶液(BSS)之一。D-Hank`s液则是无钙镁离子的Hank`s液(也有资料认为除了不含钙镁离子之外也不含葡萄糖)。BSS与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致,且配方简单,是组织培养基本用液,常用于配制培养基及其他用液,或洗细胞等,细胞在这种BSS中可生存几个小时。Hank`s液是组织培养基本用液,常用于配制培养基及其他用液,或洗涤组织、细胞等。细胞在Hank`s液中可以在一段时间内维持一定的活力。另外Hank`s液还可以用于终止EDTA的作用。配制胰酶液或者是胰酶/EDTA的基础液都是D-hanks液,而不能使用Hank`s液。这是由于钙离子和镁离子会影响胰蛋白酶的活性,也会阻碍EDTA的作用。对于Hank`s与D-hank`s液的配制,不同的文献有不同的配方,我们可以看到,两者最主要的区别就是D-hank`s液中没有钙镁离子。磷酸盐缓冲液磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂,由於它们是二级解离,有二个pKa值,所以用它们配制的缓冲液,pH范围最宽:NaH2PO4:pKa1=2.12,pKa2=7.21Na2HPO4:pKa1=7.21,pKa2=12.32配酸性缓冲液:用NaH2PO4,pH=1~4,配中性缓冲液:用混合的两种磷酸盐,pH=6~8,配碱性缓冲液:用Na2HPO4,pH=10~12。因为低温时钠盐难溶,钾盐易溶,一般情况下用钾盐比钠盐好(使用SDS-PAGE时除外)。PBS:磷酸缓冲盐溶液——具有pH缓冲作用的等渗盐溶液。多用于非活体。Hank`s:平衡盐溶液——无机盐和葡萄糖浓度接近大部分动物(植物)细胞的水平,可作为动(植)物细胞短期培养(保存)。多用于活体。Hank`s液中盐成分较PBS复杂,且有葡萄糖,可为细胞提供简单的营养,而PSB中只有磷酸根,钠,钾,氯离子,只是最简单的盐平衡缓冲液,不能为细胞提供暂时的营养。酸盐缓冲系统,一般细胞培养液的pH在7.0-7.4之间。由于碳酸盐pH缓冲系统是一种生理pH缓冲系统,大多数培养液用它来保持稳定的pH。为了维持稳定的pH,培养箱中的二氧化碳需要维持在2-10%之间,以保持培养液中溶解的二氧化碳的浓度。EDTA,常用的阳离子螯合剂。组织细胞间存在钙黏蛋白(一类Ca2+依赖的细胞黏着糖蛋白)。而EDTA可以通过螯合金属离子,破坏Ca2+或Mg2+依赖性的细胞黏着。胰蛋白酶。水解细胞间的蛋白质,方便形成细胞悬液。消化细胞时可以只使用胰蛋白酶,也可以胰蛋白酶与EDTA同时使用。胰蛋白酶的消化作用可以通过加入血清终止。EDTA的作用可以通过加入Hank`s液终止。
青霉素与链霉素一般合称双抗。青霉素主要对革兰氏阳性菌有效。链霉素对许多革兰阴性杆菌作用良好。
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