细胞名称:小鼠原代肾上皮细胞
细胞来源:源于NIH小鼠正常肾组织
组织特点:完整的肾组织,一对,血细胞少
分离试剂盒:IMT-K3(IMMORTECH)
培养试剂盒:IMT-K1-(IMMORTEHCH)
组织分离步骤▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼取材→无水乙醇洗一次(≤3s)→SolutionB洗两次→剪碎→加入10mLSolutionC,37℃,2h→离心,rpm,8min→去上清,5mLSolutionD重悬,37℃,10min→加入10mLSolutionE重悬过滤→离心,rpm,10min→去上清,加入5mLSolutionB,重悬→离心,rpm,5min→去上清,IMT-CM-培养基重悬,铺至T25培养瓶。(详尽步骤请参考IMMORTECH-IMT-K3原代细胞分离培养试剂盒说明书)
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该组织细胞虽较少,但也有一定的内容物,可在过SolutionB时用镊子轻压组织去除内容物;组织块略不受力,剪碎操作上有一定难度,其剪碎程度直接影响最终获取细胞量的多少,故尽可能剪碎至较小块;该肾组织消化时间为2h左右,期间晃动数次避免堆聚以保证组织与SolutionC接触充分。
细胞形态:细胞外边缘较圆滑,镶嵌排列呈铺路石状,细胞结合较松散,生长分裂较旺盛。细胞特性:原代培养,持续传代。细胞培养要点:该细胞增殖速度稳定,细胞传代消化时间为1-1.5min,传代密度为2X个/cm2,培养3-4d后细胞融合度可达80%或以上;由于细胞克隆中央容易出现老化,故细胞密度不适宜过大;消化时间不要过长,1-1.5min,未消化下来的细胞根据时间可弃或重新消化为宜。细胞图片
P12d
Pd
细胞潜在用途
(1)机械屏障作用,进行肾上皮细胞通透性测定、机械损伤研究等具有很高的临床意义。
(2)作为病原体的重要识别系统,启动开始的宿主免疫反应。肾部上皮细胞作为病原体的重要识别系统,含有跨膜和细胞内病原-传感模式识别受体,上皮细胞检测入侵的病原;复杂的信号结果在上皮细胞中激活,随即激活随后的先天性和适应性免疫应答。
(3)肾原代上皮细胞与肾主要病理生理疾病有关,建立小鼠肾上皮细胞体外实验模型在研究细胞的正常功能、疾病发病机理、组织器官功能重建或再造、测定药物对正常细胞的毒性以及吸入毒理学或环境毒理学研究中具有重要意义。
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