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慢病毒包装简要程序

发布时间:2017-8-18 8:33:59   点击数:

以六孔板中的1孔为例,每个样品需要1×个FT细胞。

1、取1.5ml灭菌EP管,加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及μl的无血清OptiMEM。轻柔混匀,室温孵育5min。

2、取1.5ml灭菌EP管,取9μl脂质体l溶于μl无血清Opti-MEMI培养基中。轻柔混匀,室温孵育5min。

3、将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。室温孵育20min。

4、用胰酶消化并记数FT细胞。用含血清的DMEM培养基重悬细胞。

5、在六孔板中每孔,加入1ml含血清的生长培养基,再加入DNA-脂质体复合物。

6、将1ml重悬的FT细胞(1×个细胞/ml)加入到平板中。37℃CO2孵箱中孵育过夜。

7、移除含有DNA-脂质体复合物的培养基移除,代之以DMEM(含丙酮酸钠和非必须氨基酸)。

7、转染后48-72h收获含病毒的上清。rpm离心20min,去除沉淀。

8、病毒上清-80°C贮存。

包装出来的慢病毒对NIH/3T3细胞达90%以上感染效率。

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长按







































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