随着对circRNA研究的深入，circRNA的重要性逐渐得到认识。circRNA在各种组织和细胞均有广泛分布，并且体现出组织差异性。研究表明，circRNA具有miRNA海绵、调节miRNA表达、部分circRNA具有蛋白翻译功能等多种功能。
最新的研究表明，circRNA的产生是一个缓慢的过程。由于环状RNA比较稳定，在一个相对长的时间内慢慢累积，从而达到较高丰度(ZhangY，etal.CellRep.)。因此，慢病毒系统构建稳转细胞株特别适合环状RNA表达研究。在细胞中稳定转入circRNA表达结构，长期稳定表达circRNA，才能较好的模拟环状RNA的体内表达状态和功能。
英茂盛业的慢病毒circRNA表达载体，可以大幅稳定提高circRNA表达量，精确表达指定circRNA。环化效率极高。特别适合circRNA的功能研究。
实验方案：将目的circRNA编码DNA构建到慢病毒circRNA表达载体。包装为慢病毒后转染A细胞，筛选出稳定过表达目标circRNA的A细胞株。
pLV-circ-Luci(2A)puro载体图谱：
图1、载体图谱
图2、circRNA表达框
实验步骤：
1、将目标circRNA编码序列及其两端部分内含子序列通过酶切连接插入到慢病毒circRNA表达载体pLV-circ-Luci(2A)puro。
2、将空载体pLV-circ-Luci(2A)puro及circRNA表达载体pLV-circRNA分别包装为病毒。
3、转染A细胞。用puromycin筛选出稳定细胞株。
4、通过qPCR检测circRNA表达。
检测结果：
1、设计引物分别检测目标环状RNA及总RNA（环状RNA+线性RNA）。
图3、qPCR引物位置示意图
图4、qPCR检测circRNA过表达A细胞及其对照细胞中目标环状RNA及总目标RNA表达。结果显示与对照组相比，目标环状RNA表达量显著增高。
2、circRNAqPCR产物测序结果
图5、circRNAqPCR产物测序结果显示环化部分剪切正确，序列与预期一致。
相关产品及服务：
货号
品名
VL
pLV-circ-puro载体
VL
pLV-circ-Luci(2A)puro载体
VL
pLV-circ-sfGFP(2A)puro载体
VL
pLV-circ-tagRFP(2A)puro载体
W
circRNA稳转细胞株筛选服务
咨询咨询
北京英茂盛业生物科技有限公司
order
inovogen.复方白芷酊价格大概得多少治疗白癜风秘方