细胞转染是一项基本功，绝大部分研究僧朋友都会用到。今天我们就来扒一扒转染常规细胞的那些雷区。
Invitrogen的lipo是广大老师所熟知的转染试剂，其特点：转染步骤快速简便。以它为例，我们介绍一下脂质体转染试剂的操作流程、注意事项等。
一、操作流程
事实上Lipofectamine系列产品操作流程都是又快又简单：稀释DNA以及Lipofectamine，混合2种稀释液保温20分钟，加入培养细胞中孵育24－96小时检测结果。下面是Invitrogen提供的详细流程和注意事项。
1、转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90%。细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2、对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.8μg-1.0μgDNA。
3、对于每孔细胞，使用50μlOPTI-MEMⅠ培养基稀释1μl-3μlLIPOFECTAMINE试剂。Lipofectamine稀释后保温5分钟（在30分钟内同稀释的DNA混合。保温时间过长会降低活性。）注意：即使Lipofectamine使用OPTI-MEMⅠ稀释，细胞也可以使用D-MEM培养。如果D-MEM做为Lipofectamine的稀释液，必须在5分钟内同稀释的DNA混合。
4、混合稀释的DNA（第2步）和稀释的Lipofectamine（第3步）。在室温保温20分钟。注意：溶液可能会混浊，但不会影响转染。复合物可以在室温保持6小时稳定。
5、直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。注意：如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基，替换为0.5ml无血清培养基。
6、在37℃，5％的CO2中保温24-48小时，无须去掉复合物或更换培养基或者在4-5小时后更换生长培养基也不会降低转染活性。
7、在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。
8、对于96孔板培养，不再需要提前一天进行细胞铺板，而可以直接在平板中制备复合物，然后将细胞悬浮液加入到复合物就可以了，这样进一步减少了转染时间。这种改进步骤已经过-H，-F，COS-7L和CHO细胞的试验，同传统方法相比活性稍低。快捷的步骤和蛋白表达细胞系的高效转染使得Lipofectamine非常适用于96孔板的高通量转染，比如cDNA文库的筛选和蛋白瞬时表达。
二、适用细胞株范围
不同的转染试剂所适用的细胞株范围各不相同。一个实验室常常会用到不止一种细胞株，甚至是比较特殊的细胞株。一个转染试剂所适用的细胞株越多，当然越受用户的欢迎。根据Invotrogen网站的资料，Lipofectamine已经证实可用于高达种细胞株，覆盖了相当广的范围。
要看看Lipofectamine是否适用于你现有的细胞株，可以访问以下Invitrogen网址（北京看白癜风那家比较好呼和浩特白癜风专科医院
