磷酸钙转染法的原理是通过DNA，氯化钙与磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA的极小不溶解的磷酸钙颗粒。这些磷酸钙颗粒会粘结到细胞膜上通过胞饮作用进入细胞中，从而达到外源质粒转染进入细胞的目的。
磷酸钙转染法主要用于慢病毒包装。由于慢病毒包装需要的质粒量大，脂质体用量大，可能会影响细胞状态。而磷酸钙沉淀法因为试剂易取得、价格便宜而被广泛应用。
磷酸钙转染法实验过程1
转染前24小时选择状态良好的T细胞传代，4×10^6个细胞接种于10cm细胞培养皿中。
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20-24h后，待细胞长至铺满细胞皿底约40-50%的时候，进行转染。取1.5mlEP管，加入质粒：Lentivirusvector：10ug；VSVG质粒5ug；REV质粒5ug；选择超纯水补至ul。向上述DNA溶液中加入50ul2MCaCl2溶液，轻轻吹吸混匀。
向上述液体中逐滴加入2XHBS，立即吹打混匀在至呈现乳白色。或者选用电动移液枪，一边滴加，一边用电动移液枪进行吹打。不要超过一分钟。将制备的混悬液室温放置10-15分钟。
将制备的混悬液轻轻地均匀滴入培养皿，轻轻摇匀后置于培养箱中，6-8h后换液。
因为在吹打混匀液体过程中，每个人的吹打力度不同，因此在制备混合液后可以取载玻片置于显微镜下，滴加一滴混合液，观察些颗粒大小。以便摸索实验的合适条件。
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转染12至16小时之后给T细胞换液。4
转染48小时之后，如果质粒带有荧光标签，可以通过观察荧光判断转染效率。同时收集T细胞的培养基,rpm离心10分钟去除细胞碎片。5
将离心后上清进行分装，如果一周内使用，可以临时放于4度冰箱。将其他分装的上清冻存于－80度冰箱中。因为病毒上清反复冻融，会造成病毒的滴度明显下降。相关实验试剂配制：
一.2XHBS（ml）：
NaCl:1.g,终浓度mM
KCl:0.g,终浓度10mM
Na2HPO4:0.g,终浓度1.5mM
Glucose：0.2g,终浓度12mM
HEPES：1.19g,终浓度50mM
调节pH范围在7.00-7.45过滤分装后进行灭菌。
二.2MCaCl2(ml)：
称取29.4gCaCl2-H2O，加入超纯水，过滤分装后进行灭菌。“医学方”始终致力于服务“医学人”，将最前沿、最有价值的临床、科研原创文章推送给各位临床医师、科研人员医学方已推出“实验室那些事儿”“SCI写作技巧”“文献精读与解析”“医学英语轻松学”“国自然基金申请”“临床数据挖掘”、“基因数据挖掘”、“R语言教程”、“医学统计学”、“微创动物实验培训”等多个专题课程，如需了解课程详细推文，可
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