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CRC培养条件下非恶性的原代呼吸道上皮细

发布时间:2017-12-16 15:03:45   点击数:

CRC,conditionallyreprogrammedcells,即条件重编程细胞技术,在不添加其他遗传信息、不改变细胞的遗传密码和外观表型的情况下,可使上皮细胞在体外生长、并无限增殖,该技术为也称为乔治城方法(GeorgetownMethod),利用该技术可实现来源于同一个体的正常细胞和肿瘤细胞同时增殖。该技术的核心是培养基添加Rho激酶抑制剂并和小鼠胚胎成纤维细胞共培养,该技术可以有效的避免原代细胞中的成纤维细胞污染。

来自美国四个医学中心的研究团队分别成功获取48例非小细胞肺癌的肿瘤组织(多数为原发肿瘤组织)和22例非恶性肿瘤的肺组织,将上述组织通过CRC技术进行原代上皮细胞培养,成功验证了通过CRC技术可培养肿瘤和非肿瘤组织。CRC条件下的非恶性肿瘤来源上皮细胞和non-CRC条件下的非恶性肿瘤来源上皮细胞的形态和大小相近,mRNA表达谱没有明显的差异,都可以在气液培养条件下进一步分化出纤毛细胞和粘液分泌细胞。但是两种培养条件下细胞的寿命却有极大的差异:CRC条件下的上皮细胞可以正常培养天左右,而non-CRC只有50天左右。CRC条件下的恶性肿瘤来源上皮细胞和non-CRC条件下恶性肿瘤来源的上皮细胞中有少数几组细胞形态各异、大小不等,类似于肿瘤细胞,而大多数肿瘤样本分离出的细胞形态与非恶性肿瘤细胞没有明显的差异,且细胞形态和样本来源的肿瘤分期没有关联性。48例肿瘤组织中有22例发生了基因突变和重组,靶序列测序和外显子测序结果显示只有2例肿瘤组织的突变基因在CRC培养条件下被保留HCC和S13-,但是突变率却有所下降(32%-13%,92%-15%)。但是non-CRC条件下S13-突变率由95%下降到51%。也就是说CRC条件更利于非恶性肿瘤上皮细胞的生长。肿瘤组织来源的上皮细胞拥有非恶性呼吸道上皮细胞的属性:48例肿瘤组织中有22例发生了基因突变,但是经过CRC技术进行原代上皮细胞培养之后,只有其中2例检测到突变;对9例肿瘤组织和其来源的CRC细胞的遗传物质检测结果显示均是二倍体;mRNA的表达谱检测结果显示肿瘤组织来源的上皮细胞和正常呼吸道来源的上皮细胞的结果接近;肿瘤组织和非肿瘤组织来源的CRC培养的上皮细胞大部分都是非恶性肿瘤上皮。

Fig1GrowthoflungepithelialcellsunderCRCandnon-CRCconditions.

综上,CRC技术可以培养呼吸道上皮细胞,尤其是非恶性肿瘤来源的上皮细胞,并且细胞的获得率高,增殖明显,衰老延缓,具有分化潜能,具有选择性,可以抑制成纤维细胞增殖。在少数情况下CRC技术获得的非小细胞肺癌组织来源的上皮细胞保留有原来组织的癌症基因突变,也就是说通过CRC培养条件,非恶性上皮细胞更有生长优势。

参考文献:

Non-malignantrespiratoryepithelialcellspreferentiallyproliferatefromresectednon-smallcelllungcancerspecimensculturedunderconditionallyreprogrammedconditions.Oncotarget,,Vol.8,(No.7),pp:-







































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