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培养细胞时,血清的选择至关重要

发布时间:2018-7-21 13:27:44   点击数:

血清(Serum)即血液凝固析出的淡黄色透明液体

将血液自血管内抽出,放入试管中,不加抗凝剂,则凝血反应被激活,血液迅速凝固,形成胶冻。,血清与血浆最大的区别是:在凝血过程中,纤维蛋白原转变成纤维蛋白块,血清中无纤维蛋白原。在凝血反应中,血小板释放出许多物质,各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化,如凝血酶原变成凝血酶,并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰,血液中许多化学成分的分析,都以血清为样品。

血浆(Plasma)相当于结缔组织的细胞间质,是血液的重要组成部分,呈淡黄色液体(因含有胆红素)

在血浆的化学成分中,水分占90~92%,溶质以血浆蛋白为主。血浆蛋白是多种蛋白质的总称,用盐析法可将其分为白蛋白、球蛋白和纤维蛋白原三类。

血浆蛋白质的功能有:维持血浆胶体渗透压;组成血液缓冲体系,参与维持血液酸碱平衡;运输营养和代谢物质,血浆蛋白质为亲水胶体,许多难溶于水的物质与其结合变为易溶于水的物质;营养功能,血浆蛋白分解产生的氨基酸,可用于合成组织蛋白质或氧化分解供应能量;参与凝血和免疫作用。

血清-天然的培养基

培养基的主要成份中动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用.在动物血清的应用中牛血清又是最为广泛的,所以血清是医药生物技术产品中重要的原材料之一。保证血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。

血清的种类

目前用于组织培养的血清主要是牛血清,培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。

选择用牛血清培养细胞的原因:来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的,但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能。牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;

小牛血清取自出生10-30天的小牛。显然,胎牛血清是品质最高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

血清的主要成分

血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展,但仍存在一些问题。主要是:

一:血清的成份可能有几百种之多,目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识,这给研究工作带来许多困难。

二:血清都是批量生产,各批量之间差异很大,而且血清保存期至少一年,因此,要保证每批血清的相似性极为困难。从而使实验的标准化和连续性受到限制。

三:不能排除血清中含有易变物质,这被认为是“瓶中恶化”的原因之一。

血清的主要作用

提供基本营养物质:氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等,是细胞生长必须的物质;

提供激素和各种生长因子:胰岛素、肾上腺皮质激素、类固醇激素(雌二醇、**、孕酮)等.生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等;

提供结合蛋白:结合蛋白作用是携带重要的低分子量物质,如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等,转铁蛋白携带铁.结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用;

促进接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤;对培养中的细胞起到某些保护作用:有一些细胞,如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用和消化作用。血清还含有一些微量元素和离子,他们在代谢解毒中起重要作用,如SeO3,硒等。

血清也会存在的问题

血清成分复杂,虽含许多对细胞有利成分,也含有对细胞有害的成分,使血清有几个明显的缺点:

一、对大多数细胞,在体内状态,血清不是它们接触的生理学液体,只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清,因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态,血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长(表皮细胞);

二、血清含一些对细胞产生毒性的物质,如多胺氧化酶,能与来自高度繁殖细胞的多胺反应(如精胺、亚精胺)形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长,甚至造成细胞死亡;动物个体不同,血清产地、批号不同,每批质量差异甚大,其成分不能保持一致;

三、取材中可能带入支原体、病毒,对细胞产生潜在影响,可能导致实验失败或实验结果不可靠性;血清的使用使得实验和生产的标准化困难,其中的蛋白质使得某些转基因蛋白生物药品生产中分离纯化工作很难完成;

四、大规模生产中,血清来源越来越困难,价格昂贵,是构成动物细胞培养生产成本的主要部分之一。

尽管在细胞培养中存在一些不确定的因素,但血清仍然是细胞培养液中最基本的添加物,尤其是在原代培养或细胞生长状态不良时,常常会先使用有血清的培养液进行培养,待细胞生长旺盛后再换成无血清培养液。

其实一种血清可以满足所有细胞生长所需,在换血清品牌,或者同一品牌换批次时都要做好验证工作,相对来讲批次间差距越小越好,不为品牌,不为价格,只买对的。

以下为中乔新舟几款血清检验图

上海中乔新舟生物科技有限公司

1、原代细胞:ScienCell(中国区正规一级代理)人源和动物源各种原代细胞。

2、培养基:原代细胞专用低血清、无血清、无异源蛋白无动物成分培养基。

3、细胞培养试剂:胎牛血清、原代细胞转染试剂盒、细胞实验检测试剂盒、细胞生长因ELISA试剂盒、定量PCR芯片试剂盒、DNA/RNA及细胞裂解物等。

4、细胞系(株):种类丰富(余种),已通过STR鉴定;提供细胞株完全培养基。

5、自研产品:支原体检测/清除试剂盒、端粒酶检测试剂盒、人源/动物源ELISA试剂盒等系列产品

6、技术服务:绿/红色荧光蛋白标记、荧光素酶标记、慢病毒介导基因沉默或过表

达及稳转株的构建,细菌基因敲除、细胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成

功能学实验。

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长按







































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