一、文献来源:DOI:10./-.CAN-17-,CancerResearch·Jan影响因子8.5
二、胶质瘤发生与信号通路:表皮生长因子受体一信号转导和转录激活因子3(EGFR-STAT3)信号通路与恶性胶质瘤的发生、发展密切相关,EGFR可通过JAK依赖和非依赖两种途径活化STAT3,STAT3是的异常激活可诱导肿瘤细胞增殖,下调可以促进肿瘤细胞凋亡,是信号通路上的关键节点。以EGFR—STAT3为靶点的分子靶向治疗是近年来的研究热点,有望为恶性胶质瘤的治疗带来新的希望。
图:胶质瘤发生信号通路
正文
模型:胶质瘤。
研究手段:
1.细胞鉴定
上海翼和生物帮助作者对文章涉及的所有细胞系进行了STR鉴定。读了这篇文章,我们才知道,高档次的论文需要翼和这么专业的细胞鉴定机构。
2.胶质瘤病人样本
发现胶质瘤预后不良病人样本中TRIM59基因表达异常上调
3.细胞功能试验
(1)通过细胞实验证实EGFR通过SOX9上调TRIM59基因表达;
(2)通过细胞实验证实,敲除TRIM59基因,阻断EGFR—STAT3信号通路,STAT3被抑制;
(3)免疫沉淀STAT3蛋白,发现TRIM59-STAT3相互作用;
(4)突变TRIM59特定氨基酸,发现TRIM59-STAT3相互作用消失。
4.结论
TRIM59介导EGFR增强STAT3表达,从而刺激胶质瘤生长通路。
细胞系鉴定FAQ
1.什么是细胞系鉴定?
所谓细胞系鉴定即通过STR(短串联重复)图谱所建立细胞系的遗传特征。一株细胞系的遗传特征确立后,细胞系可以通过定期的检测,以防止出现细胞系被误认或交叉污染的情况。
2.为什么要进行细胞系鉴定?
由于细胞系发生交叉污染或身份误认,将导致实验数据的无效或数据误导。NIH已发出公告,讨论细胞系鉴定的必要性与重要性,并且越来越多的的期刊要求文章发表前、需提供细胞鉴定数据。
3.细胞系用错的概率有多大?
据ATCC估计,年错误使用细胞的概率是16%,年是18%。根据我们的经验,国内细胞系用错的概率不低于20%。即如果一个研究所有二十个课题组,按概率估计,有4个课题组用的细胞是错的。
4.什么细胞最容易污染别的细胞?
Hela细胞。因为她长得快、长得好嘛。当你发现自己的一个培养瓶里的细胞突然长得很好,而以后都用它传代做实验的话,十之八九是搞错了。
5.有哪些细胞曾被Hela污染
lnt-、HEp-2、WISH等一百余种。.
6.如何进行细胞系鉴定
细胞系鉴定目前主要基于国际身份认证委员会的标准。依据该标准,可以通过多重荧光PCR技术,对人源8个STR位点以及1个性别决定位点进行检测。下表为这些位点的具体的遗传信息。
Locus
Location
motif
TH01
11q15.5
AATG(16)
TPOX
2p23-2pter
AATG
vWA
12p12-pter
TCTAComplex(16)
Amelogenin
Xp22.2-22.3、Y
Indel
CSF1PO
5q33.3-34
AGAT
D16S
16q24-qter
GATA
D7S
7q11.21-22
GATA
D13S
13q22-q31
AGAT
D5S
5q23.2
AGAT
7.什么时候需细胞系鉴定
当建立或获得一个新的细胞系时;
一个涉及到细胞试验项目开始/结束时
在细胞冻存之前,或细胞已连续培养2~3个月
发表文章或申请课题经费前
细胞系表现不稳定或结果与预期差别较大时
当实验室使用超过一种细胞系时,所有细胞系最好先鉴定以排除交叉污染的可能
8.如何提供鉴定样本
每种细胞需单独收集在1.5ml离心管中,细胞数目不少于个。细胞需要离心沉淀,并且以PBS清洗尽可能去除上清培养基,沉淀沉淀进行冰冻保存与寄送。
9.如何知道细胞系是否发生交叉污染了
如果存在细胞系之间发生交叉污染,而且鉴定用的细胞可能有两种以上的细胞系时,那么在进行STR位点检测的时候,多个位点会出现两个以上的峰。峰高值表示该等位基因的信号强度,理论上峰值与样本的DNA浓度有直接的关系。因此,存在交叉污染的混合细胞系中,其中一个位点中某些峰会明显高于其他的峰,其中大峰是属于混合细胞系中那个主要细胞系,而小峰则属于那个次要细胞系。
值得注意的是,当发生两个或以上细胞混合的时候,检测结果看起来非常像细胞系的“遗传不稳定”——当一个细胞系存在亚群时,尤其是一些癌细胞系,由于遗传不稳定的存在,在一些位点的STR特性会不同。因此经验丰富的分子专家是非常重要的,他能够帮助分析复杂的电泳图谱(STR峰图),从而判断是否由于发生细胞系交叉污染而导致多等位基因情况。上海翼和应用生物,作为老牌的遗传技术服务公司,十年以上基因分型经验,可以帮你解决你的疑惑。
10.如何进行数据库比对
(1).CellLineIntegratedMolecularAuthentication(CLIMA)