动物细胞的培养基
l动物细胞的培养基组成----氨基酸、葡萄糖、蛋白质、核酸类物质、维生素、辅酶、激素、生长因子、微量元素、缓冲系统。
1、培养细胞的生存环境
适宜的温度----人和哺乳动物培养细胞最适温度均为35-37℃。
气体环境和氢离子浓度----需要一定量的O2和CO2(95%空气+5%CO2);pH7.2-7.4
营养物质----适当的培养基
环境无毒和无菌:双抗、消毒
渗透压:
培养液要求
氨基酸---氮源
盐类---钠离子,钾离子,镁离子,钙离子,氯离子,硫酸根离子,磷酸根离子,碳酸氢根离子等葡萄糖:供能
缓冲系统---CO2缓冲系统或HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸)
生长因子---PDGF,EGF,FGF等
其它成分---维生素,矿物,有机补充物,激素等
平衡盐溶液(BSS)
功效:
①维持渗透压
②提供缓冲系统
③提供水分和无机盐
4、天然培养基
天然培养基如----血清,血浆,组织浸出液等
优点----营养成分丰富,培养效果好
缺点----来源受限。成分复杂,影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污染
天然培养基的类型:
[A]乳蛋白水解物培养基
[B]酪蛋白水解物培养基
[C]血清及胚胎浸出液培养基
5、合成培养基
合成培养基--是根据细胞生存所需物质的种类和数量,用人工方法模拟合成的。如TC、MEM、RPMI-、DMEM等。
优点--标准化生产,组分和含量相对固定,成本低。
缺点--缺少某些成分,不能完全满足体外细胞生长需要。目前常用合成培养基+血清来培养细胞
合成培养基的类型:
(A)Eagle培养基(内含13种氨基酸、9种维生素、多种无机盐)
(B)Ham氏F10培养基(内含20种氨基酸、多种维生素、10种无机盐)
(C)培养基
(D)Waymouth氏MB/1培养基
(E)NCTC培养基
6、无血清培养基
无血清培养基----在合成培养基中加入起血清作用的种类激素和生长因子,如铁转运蛋白、乙醇胺、胰岛素、硒、氢化可的松、维生素C、促胃激素等等。
血清的成分:
①激素:胰岛素、胰高血糖素、生长激素、孕酮、氢化可的松、雌二醇等
②生长因子:表皮生长因子、神经生长因子、成纤维生长因子、血小板生长因子
③结合蛋白:白蛋白、转铁蛋白等
④贴壁和铺展因子物质:如纤维粘连素、多聚赖氨酸、胶原、血清铺展因子等。
⑤多种金属离子
⑥低分子量营养因子:维生素A、维生素C、脂肪酸等
⑦不明成分
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