pLKD-CMV-GPR-U6-shRNA载体
3种病毒载体转染T细胞48后荧光表达结果
摘要：为了构建诱骗受体3（decoyreceptor3，DcR3）的RNAi慢病毒载体并对其干涉效果进行鉴定，设计合成了3条针对DcR3基因的shRNA干扰序列，构建于慢病毒载体质粒中，转化大肠杆菌感受态细胞，筛选阳性克隆进行菌落PCR鉴定，对PCR鉴定阳性的克隆进行测序分析，将目的质粒感染T细胞qRT-PCR测定包装的病毒滴度，转染HepG2细胞qRT-PCR筛选干扰效果最佳载体。结果显示PCR结果显示扩增的目的基因DcR3已成功插入pLKD-CMV-GPR-U6-shRNA载体，阳性克隆测序结果显示与目的基因序列一致，目的质粒转染48h后，80%以上T细胞表达绿色荧光，qRT-PCR法测定包装的病毒滴度为分别为6.58×IU/ml、4.60×IU/ml、4.63×IU/ml，其中慢病毒载体3干扰效果最好，达到61.44%。
关键词：普通外科学，诱骗受体3，RNAi，shRNA，慢病毒载体
基金项目：教育部高校博士点基金（05）
作者：赵团结，许英晨，伍冀湘
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