摘要：对18株乳酸菌的菌体细胞和无细胞提取物的DPPH自由基清除能力、羟自由基的清除能力、超氧阴离子自由基的清除能力、还原能力等5项抗氧化指标进行比较，并对高抗氧化活性的乳酸菌进行抗性筛选，鉴定出符合要求的菌株。实验结果表明该18株乳酸菌具有不同的抗氧化能力，编号为L4、L5、L8、L14、L18的菌株具有较高的抗氧化活性，其中，菌株L14抗人工胃液和胆盐的能力较强，有作为天然抗氧化剂的应用前景。
1乳酸菌抗氧化能力比较
1.1乳酸菌对DPPH自由基的清除能力
由表2可知，18株乳酸菌的菌体细胞和无细胞提取物均呈现一定的DPPH自由基清除能力，但清除能力较弱且差异不大，清除范围为4.71%-18.91%。本实验18株乳酸菌中，L8、L13和L18菌体细胞的DPPH自由基清除率较强，L9无细胞提取物的DPPH自由基清除率较强，与其余菌株相比差异显著(p＜0.01)。
1.2乳酸菌对羟自由基的清除能力
由表3可知，18株乳酸菌的菌体细胞和无细胞提取物均呈现一定的羟自由基清除能力且差异较大，清除范围为2.32%-34.89%。L4、L9和L15这3株乳酸菌对羟基自由基清除能力较强，其中L4无细胞提取物羟基自由基清除率高达34.89%，相当于0.40mg/mLVC，与其他菌株差异显著(p＜0.01)。乳酸菌具有较强的羟自由基清除能力主要是因为乳酸菌细胞内存在螯合Cu2+和Fe2+的天然物质，能够从根本上减少羟自由基。
1.3乳酸菌对超氧阴离子的清除能力
由表4可知，18株乳酸菌的菌体细胞和无细胞提取物均呈现一定的超氧阴离子自由基清除能力，但清除能力较弱且差异不大，清除范围为5.36%-28.78%。L8、L12这2株乳酸菌对超氧阴离子自由基清除能力较强，其中L12的无细胞提取物的超氧阴离子自由基清除率为28.78%，相当于0.20mg/mLVC，与其他菌株差异显著(p＜0.01)。
1.4乳酸菌的还原力
由表5可知，仅有3株乳酸菌的无细胞提取物不具有还原力，其他乳酸菌菌体和无细胞提取物均检测出一定的还原能力，但还原力差异较大。其中L5、L15和L18这3株菌菌体细胞和无细胞提取物的还原力均在20%以上，L5还原能力最强，其菌体细胞和无细胞提取物的还原力分别高达86.18%和89.69%，与其他菌株差异极显著(p＜0.01)。
2乳酸菌的抗性能力
2.1乳酸菌的抗酸能力
实验中将筛选得到的5株抗氧化能力较强的乳酸菌在pH=3.0的人工胃液中进行复筛实验，结果如表7所示，存活率在30%以上的有2株，其中L14达94.98%，与其它菌株差异极显著(p＜0.01)。
2.2乳酸菌在胆盐中的耐受力
实验中将5株乳酸菌在质量分数分别为0.1%、0.2%、0.3%和0.5%的胆盐溶液中进行复筛实验，由表8可知，随着胆盐质量分数的增大，菌株的耐受力逐渐降低，5株乳酸菌对0.5%胆盐溶液耐受力较差。
3优良乳酸菌的鉴定
3.1优良乳酸菌的16SrDNA分析和系统发育进化树的建立
L14的16SrDNA序列PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测后，结果如图2所示。阴性对照无条带，说明扩增未出现污染；第3泳道大约bp的位置有特异性扩增片段，符合预期扩增片段长度。通过16SrDNA序列比对分析，发现L14与GeneBank数据库中已知乳酸菌具有高达%的同源性。将菌株L14与GenBank中15株乳酸菌一起构建系统发育进化树，结果如图3所示，菌株L14与副干酪乳杆菌亲缘关系最近。
小结
通过对18株乳酸菌的不同组分的抗氧化活性进行了研究，发现其抗氧化能力不同且差异显著，其中菌株L4、L5、L8、L14、L18抗氧化能力较强，在菌体浓度为CFU/mL时，L5菌体细胞和无细胞提取物的还原能力分别高达86.18%和89.69%；L14菌体细胞和无细胞提取物的抗脂质过氧化能力分别高达62.48%和46.21%。结合抗胃酸和抗胆盐能力最终筛选得到1株具有高抗氧化能力和抗性能力菌株L14，经鉴定，其为副干酪乳杆菌（Lactobacillusparacaseisubsp.Paracasei），有较大的深入研究价值和潜在的应用价值。
参考文献
[1]刘珊春,赵欣等.高抗氧化乳酸菌的筛选鉴定[J].食品与发酵工业,,43(8),59-66.
[2]OZGUND，VURALH．IdentificationofLactobacillusstrainsisolatedfromfaecalspecimensofbabiesandhumanmilkcolostrumbyAPI50CHLsystem[J].JournalofMedicalGenetics＆Genomics，．
