慢病毒简介
慢病毒载体(Lentiviralvector)是在人类免疫缺陷I型病毒(HIV-1)基础上改造而成的,能利用逆转录酶和整合酶,将自身的RNA转变为DNA整合到宿主细胞的染色体中,从而使目的基因在宿主细胞中长期而稳定的表达。
慢病毒包装需要利用表达载体和包装载体同时共转染细胞,在细胞中进行病毒包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。
慢病毒载体系统的发展
HYY提供的HIV骨架慢病毒表达系统由第三代慢病毒载体系统优化所得,具有增加慢病毒滴度、加强生物安全性的特点。
HYY慢病毒包装流程
HYY慢病毒滴定测定
慢病毒滴度(TU/ml):数出最后两个孔中含有荧光细胞的孔中的荧光细胞个数。将得到的数值各自除以相应的稀释倍数就得到了病毒原液的滴度值。
慢病毒储存与稀释
1.病毒的储存:病毒液可暂时放置于4℃保存(请于一周内用完);如需长期保存请放置于-80℃。
1.1病毒可以存放于-80℃6个月以上;但如果病毒储存时间超过6个月,建议在使用前需要重新滴定病毒滴度。
1.2反复冻融会降低病毒滴度:每次冻融会降低病毒滴度10%;因此在病毒使用过程中应尽量避免反复冻融,为避免反复冻融我们强烈建议客户收到病毒后按照每次的使用量进行分装。
2.HYY提供的Lentivirus溶于DMEM培养基。病毒使用时请将病毒从-80℃冰箱取出,冰浴融化,使用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)混匀分装后4℃保存(请尽量在三天内用完)分装后使用。
3.HYY提供的慢病毒单位标识为TU/ml,即每毫升慢病毒液中含有生物活性的慢病毒颗粒数。TU为“transducingunits”的缩写,表示可已感染并进入到目标细胞群中的病毒基因组数。
HYY慢病毒包装系统优势
1.对分裂期和非分裂期细胞均有感染作用,可高效转染难转染的细胞;
2.构建稳定细胞株;
3.调控目的基因的定时、定量表达;
4.适用于活体动物模型(invivo)的基因操作;
5.适用于转基因动物,特别是转基因大鼠的制备;
6.安全性高,免疫原性低。
Lentivirus使用安全注意事项
HYY提供的Lentivirus为“自杀”性病毒,即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞,也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。
Lentivirus中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,属于假型病毒。
该病毒仍然具有可能的潜在的生物学危险,建议不要使用编码已知或可能会致癌的基因的假型病毒。除非已经完全公认某个基因肯定没有致癌性,否则均不建议采用假型病毒进行生物学实验。
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