对皮肤致敏的潜在性评价是物质危害和风险评估的一个组成部分。目前的非动物性方法有相当多的研究，其中两种—直接肽反应试验和基于角质细胞的ARE-Nrf2荧光素酶报告基因测试方法（基于KeratinoSens?试验验证）已在年被OECD指南采用。KeratinoSens?试验检测的是角质形成细胞激活事件，是一种公认的OECDTGD方法。LuSens试验采用类似KeratinoSens?试验的原理，通过使用含有由NADPH（醌氧化还原酶1基因和荧光素酶基因）的大鼠抗氧化反应元件（ARE）组成的报告基因构建体来检测人角质形成细胞激活，从而评价化学品是否具有致敏性。
为了达到欧洲验证标准，作者在5个实验室进行多中心验证研究，分为两个阶段来评估方法的通用性、重复性、准确性。第一阶段是测试8种非编码物质，评估方法的通用性。第二阶段对20种编码物质进行测试，对该方法的室内和室间的重复性及准确性进行了评价。结果表明，该试验对皮肤致敏剂的识别准确可靠。
试验采用人角质形成细胞细胞系—LuSens细胞，整个试验过程分为两部分组成：预实验和主实验。预实验用MTT法测试细胞毒性，选择CV75确定主实验所使用的剂量范围。主实验中最高试验浓度为1.2×CV75。预实验时，透明96孔板中每孔接种1×个细胞（μL），测试物质溶解在DMSO中制备试验液，μM的乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA）作为阳性对照（PC），μM的DL-乳酸（DL-LA）作为阴性对照（NC）。如果观察到EGDMA细胞毒性高于30％，则进行预实验降低EGDMA浓度。染毒后，孔板用透气胶带密封培养48小时，再用MTT法测细胞活性。然后与溶剂对照（VC）相比计算细胞活性降低不超过75％（CV75）时的浓度。
主实验评价在非细胞毒性浓度时荧光素酶的表达。细胞接种到透明和白色平底96孔板中。接种在透明板中的细胞用于MTT细胞毒性测定，白色板用于荧光素酶测定。按预实验，制备阳性、阴性对照和测试物质试验浓度，并以相同的方式染毒。在处理后，用光度计通过荧光素酶检测测定ARE激活情况。用下面的公式将处理细胞（TC）的相对光单位（RLU）除以载体对照（VC）处理的细胞的RLU，计算光信号的倍数诱导值（FI）：FI=（RLUTC）/（RLUVC）。每个实验至少独立重复（运行）两次。如果两次试验的分类不一致，则进行第三次试验。
LuSens方法的验证研究主要用于满足OECD规定的基于KeratinoSens?方法的相似或改进的体外皮肤致敏ARE-Nrf2荧光素酶测试方法的标准的要求。最初LuSens方法测试了74余种物质来验证其对皮肤致敏物的预测能力和准确性，其准确性为82%。本次有五个实验室参加LuSens多中心验证研究。结果显示，LuSens在实验室内和实验室间预测的重复性达%，对识别皮肤致敏剂的准确性超过80%，与体内的数据保持良好的一致性，符合OECD的要求。对于相同组的测试物质，LuSens和KeratinoSens?方法的准确性相同，为85％。每个方法对20种PS物质有一个物质预测不同；LuSens方法过度预测了水杨酸甲酯，KeratinoSens?低估了丁子香酚。这些结果表明该方法具有良好的通用性、重复性和准确性，达到监测皮肤致敏物的标准。
参考文献：
TzutzuyRamireza,NadineSteina,AlexandraAumanna,etal.Intra-andinter-laboratoryreproducibilityandaccuracyoftheLuSensassay:Areportergene-celllinetodetectkeratinocyteactivationbyskinsensitizers[J].ToxicologyinVitro,(32):-
主编：冯文茹
供稿：李昕
运营：潘宏健
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