细胞器(Organelle)是分布在细胞质内具有特定形态和功能的微结构,是真核细胞执行生命活动的功能区域。细胞器在细胞中如何介导和调节,是细胞生物学中一个重要而又具有挑战性的问题。
…以内质网、高尔基体、线粒体、溶酶体等细胞器(包括细胞质膜、核膜等膜性结构)之间的互作为研究主线,绘制细胞器互作网络图谱,阐明细胞器互作网络的建立、维持、动态变化及其调控机制,揭示细胞器互作网络的生理、病理功能。直接费用资助强度最高可达万元/项。
国家自然科学基金委员会年度重大研究计划
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用合适的细胞器标记染料或特异性抗体对特定细胞器进行检测和研究也越来越成为必不可少的工具。Invitrogen?MolecularProbes?可提供最齐全和丰富多样的细胞结构标记产品,适用于显微镜、HCS、流式细胞仪等多种检测平台。
细胞骨架
细胞骨架是细胞结构的基本组分,除了具有细胞支架的作用外,还参与了细胞器转运、细胞分裂、细胞运动和信号传导等活动,在细胞健康和疾病过程中发挥了非常关键的作用。
常用标记包括可与细胞骨架亚类反应的各种染料结合物和荧光蛋白。
图示:AlexaFluorphalloidin染色细胞骨架蛋白Actin(蓝色荧光)的成纤维细胞多色荧光分析。
线粒体
线粒体是一种多形性细胞器,其结构因细胞类型、细胞周期阶段和细胞内的代谢状态不同而异,主要功能是通过氧化磷酸化和脂质氧化生成能量。
常用特异性染料MitoTracker或JC-1等标记。
图示:牛肺动脉内皮细胞(BPAEC)染色dihydroethidium和MitoTrackerGreenFM(M,绿色)的活细胞成像。
溶酶体
溶酶体内含多种消化酶,功能是分解废物及细胞碎片。溶酶体与隔离膜融合形成自噬性溶酶体是自噬通路的倒数第二步。
细胞通透性LysoTracker只需纳摩尔级浓度即可完成溶酶体的细胞器检测,成为最有效的溶酶体追踪工具。
图示:LysoTrackerDeepRed标记HeLa细胞。
过氧化物酶体
过氧化物酶体主要功能是催化脂肪酸的氧化,是维持哺乳动物脑部和肺部正常功能的关键,且参与了能量代谢,主要负责去除细胞中有害的过氧化物,且在脂肪酸代谢过程中发挥了重要的作用。
可用CellLight系列荧光蛋白或SelectFXPeroxisome特异性标记。
图示:过氧化酶体由SelectFXAlexaFluor标记试剂盒标记(货号:S,绿色)
内含体
内含体(Endosome)的释放与细胞的内吞作用(endocytosis)、细胞吞噬等紧密相关。
通常可以通过追踪颗粒或蛋白质结合物被细胞吞噬后的酸化作用,检测各种细胞摄取和内化过程,可采用pH敏感的pHrodo荧光染料检测细胞通路的各个阶段的过程。
图示:吞噬细胞由pHrodoRedE.coliBioParticles(货号P)标记。
内质网
内质网(ER)在脂质和蛋白质合成、蛋白质分子伴侣和折叠以及钙平衡中发挥了关键作用。
常用三种技术标记:ER-Tracker染料、CellLight技术、SelectFXER标记。
图示:内质网经ER-TrackerGreendye(货号:E)染色的人U2OS活细胞成像。
高尔基体
高尔基体是负责大分子加工的细胞器,这些大分子随后被分泌到细胞外或送到细胞内供其他细胞器使用。
许多可对高尔基复合体进行选择性染色的细胞透过性探针可用于脂质代谢和转运研究,亦可用于检测脂质的合成速度,如BODIPY系列染料;抗体和凝集素(LectinHPAAlexaFluor偶联物)均可用于靶向固定细胞中的高尔基复合体,荧光蛋白(CellLightGolgi系列)适用于活细胞追踪。
图示:由CellLightGolgi-GFP试剂(C,红色)标记的人动脉平滑肌细胞(HASMC)成像。
细胞核/核仁
细胞核是由核膜、核仁和核纤层组成的膜包裹的细胞器,是基因表达的位点,也是整个细胞的控制中心,在细胞的代谢、生长、分化中起着重要作用,是遗传物质的主要存在部位。
通过核蛋白染色或直接对核酸进行染色可特异性观察细胞核,常用PI、7-AAD、DAPI、Hoechst、SYTO和SYTOX系列、TO-PRO-3iodide等,还有NucBlue、NucGreen、NucRed即用型滴瓶染料便捷高效。
图示:MRC-5细胞经SYTORNASelectgreen-fluorescentcellstain(货号:S)染色。细胞核经DAPI染色。
细胞质/质膜
质膜主要成分是蛋白质和脂质,它是信号传导通路及离子平衡的关键,是便捷的细胞轮廓标记物。
许多质膜探针已在HCS分析中用于自动分割(CellMask系列)。亲脂性染料一般可用作质膜染料,尽管不同细胞类型之间的质膜染色存在差异,但荧光标记的小麦胚芽凝集素(如WGAAlexaFluor系列偶联物)仍被广泛使用,CellTracker和Qtracker系列染料可特异性进行胞质染色。
图示:由CellLightPlasmaMembrane-GFP(C,绿色)标记的U2-OS细胞膜染色。
常见细胞结构细胞器标记指南
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转自:赛默飞生命科学
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