导读
circRNA一般认为是在细胞质中，以转录后调控的形式影响下游基因功能，参与生物学过程。那么，circRNA是否也会在细胞核中发挥功能呢？又是通过什么样的途径行使？通过一篇发表在《CellDeathandDifferentiation》上的研究，我们来看看circRNA在细胞核中的角色。
研究背景
circularRNAs是一类闭合环状的RNA序列，可以来源于外显子区域，内含子区域或者保留内含子的外显子成环而来。现有高通量技术的发展，使得我们能发现细胞中大量的circRNA。已有的研究表明，circRNA可以通过miRNA海绵吸附的形式产于转录后调控，可以与RNA结合蛋白互作影响蛋白活性。该研究通过细致的研究，挖掘了在乳腺癌致瘤过程中，circ-Amotl1的重要角色。
研究结果
1.circRNA鉴定
为挖掘肿瘤中circRNA的功能，研究人员通过之前大量的肿瘤细胞与非肿瘤细胞测序数据挖掘，发现一个类血管动蛋白1来源的circRNA(has_circ_,circ-Amotl1)。组织样本研究结果显示，circ-Amotl1在乳腺癌的癌组织中明显比癌旁组织表达高，在肿瘤细胞系中比非肿瘤细胞系中高。
通过特异性的siRNA干扰，研究人员发现细胞增殖减弱，凋亡增强；异位表达circ-Amotl1增强细胞增殖，减少凋亡比率。因此，circ-Amotl1是一个影响细胞增殖凋亡功能的circRNA。
为进一步证明circ-Amotl1在肿瘤中的作用，研究人员用裸鼠移植模型进行了验证。结果显示，过表达组肿瘤体积更大，凋亡细胞变少，发生骨转移。更进一步的单细胞克隆培养和移植实验也都验证了circ-Amotl1的异常表达会影响肿瘤的形成。因此，circ-Amotl1是一个影响肿瘤形成的circRNA。
2.circRNA与蛋白结合
为更进一步的理解circ-Amotl1在肿瘤发生过程中的作用，研究人员想到了是否可以有潜在结合的致瘤蛋白。Pulldown实验表明，circ-Amotl1可以特异性的和c-myc，EGF，c-myb，NF1和AKT结合，且c-myc结合最强。进一步的pulldown验证实验也表明两者可以相互拉下对方。因此，circ-Amotl1可以和致瘤蛋白c-myc结合。
3.circRNA对蛋白的功能影响
c-myc是一个影响大量基因表达的肿瘤基因。因此，研究人员对异位表达circ-Amotl1和对照细胞中c-myc的靶基因进行了检测。结果显示，大量的基因发生上调。此外，进一步实验验证表明，circ-Amotl1的存在对于c-myc结合到靶基因启动子区，影响他们的表达是必需的。
一般认为，circRNA是在细胞质中发挥功能。但是对circ-Amotl1的定位显示，其主要定位于细胞核中，与c-myc定位一致；沉默circ-Amotl1，减少c-myc在核定位。因此，circ-Amotl1的存在对于c-myc的核定位非常重要。
那么，具体的结合位点在哪里？通过对c-myc蛋白结构的了解及circ-Amotl1的序列特征，研究人员通过软件预测了两者之间的结合关系，研究人员发现circ-Amotl1的中心区域主要结合到c-myc的C末端。通过突变结合位点区域，确实发现两者不再发生结合，无论是细胞还是小鼠模型中。因此，结构分析表明circ-Amotl1通过与c-myc的C末端的结合影响其核定位和功能行使。
研究结论
该研究通过高通量测序数据挖掘和验证，找到了影响乳腺癌肿瘤发生的circRNA（circ-Amotl1），深入的功能机制研究表明，circ-Amotl1通过在细胞核中结合c-myc影响其对下游靶基因的调控。该研究为拓宽circRNA在细胞核中的功能提供了思路。
参考文献：QiYang,WilliamWDuetal,.AcircularRNApromotestumorigenesisbyinducingc-mycnucleartranslocation.CellDeathandDifferentiation(),1–12.
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