首先作者通过3D培养获得结肠癌西妥昔单抗耐药细胞系，并加以验证：在对照组细胞中加入西妥昔单抗药物,24h通过检测增殖markerki67以及凋亡markerCaspase-3，发现对照组细胞增殖能力降低，凋亡增加，而耐药细胞系无明显变化，证明细胞获得耐药性。
作者通过全基因组测序以及RNA-Seq，在耐药组与对照组间筛选到个转录本上调，个转录表达下调，在这些转录本中上调最明显的是lncRNAMIRHG，同时还发现了上调最明显miR-b以及miR-。研究发现，lncRNAMIRHG与miR-b以及miR-表达密切相关，可能为两种MIRNA的前体。
为了探究lncRNAMIRHG以及所表达的miR-b与miR-在结肠癌西妥昔单抗耐药过程中发挥的作用，作者在耐药细胞中进行了miR-b与miR-的敲减，发现耐药组细胞克隆减少，裸鼠成瘤体积减小。而在对照组细胞中过表达miR-b与miR-，发现细胞克隆增多，裸鼠成瘤体积增大。
为了探究miR-b与miR-参与的西妥昔单抗的耐药机制，作者寻找在耐药组与对照组中表达下调的基因，筛选到wnt信号的负向调控因子DKK1以及DKK3，在耐药组中表达下调超过30倍，提示miR-b与miR-可能作用于wnt信号通路。
作者首先进行了双荧光素酶报告实验，证明miR-b、miR-与DKK1以及DKK3存在靶向关系，可能参与抑制DKK1以及DKK3的表达。同时，检测其他wnt通路负向调控因子ZNRF3、RNF43、APC2蛋白水平也发生了降低。
进而作者在耐药细胞中检测发现WNT信号通路激活。在耐药组肿瘤模型鼠中，b-catenin由胞质转移至胞核。
以上实验证明，miR-b与miR-抑制了wnt信号通路负向调控因子的表达，进而激活了wnt信号通路。
那么，在西妥昔单抗耐药发生过程中，是什么机制引起的miR-b与miR-表达上调呢？前面我们提到miR-b与miR-由MIRHG基因转录而来，作者推测可能存在调控MIRHG的转录因子，进而影响miR-b与miR-的表达。
通过RNA-Seq数据分析，作者北京白癜风哪里治的好北京中医院治疗白癜风多少钱
