自噬的过程、形态学变化、分类、影响因素
自噬的过程
细胞质中的线粒体等细胞器首先被称为“隔离膜”的囊泡所包被,这种“隔离膜”主要来自于内质网和高尔基体;
囊泡逐渐闭合最终形成双层膜结构,即自噬体，其大小约为nm左右，囊泡内常见的包含物有胞质成分和某些细胞器如线粒体、内吞体、过氧化物酶体等;
自噬体的外膜与溶酶体融合形成降解自体吞噬泡；
由溶酶体内的酶降解自体吞噬泡中的内容物和内膜。
自噬的形态学变化
在电镜下能观察到：高尔基体等细胞器膨胀，细胞核固缩，形成大量的吞噬泡，细胞质膜发生特化。
自噬的分类
①巨自噬（Macroautophagy）：最为常见，即上面说的自噬过程。
②微自噬（Microautophagy）：是指溶酶体主动、直接吞噬胞浆成分的一种方式。
③分子伴侣介导的自噬（CMA）：一些分子伴侣，如hsp70，能帮助未折叠蛋白转位入溶酶体。
影响因素
包括：饥饿、蛋白聚集、凋亡、缺氧、病原体感染等，均会造成细胞自噬产生。正常情况下，细胞自噬发生的概率很低，只有受到以上因素的影响时，自噬才会被激活，参与机体稳态调控。
自噬的调控与信号通路
自噬的调控1、依赖mTOR（哺乳动物雷帕霉素靶点）途径的自噬PI3K-AKT-mTOR信号通路AMPK-TSC1/2-mTOR信号通路
2、其它的信号通路
3-甲基腺嘌呤（3-MA）通过抑制ClassⅢPI3K的活性抑制自噬。
bclin1和UVRAG作为正调控子，抗凋亡因子bcl-2作为负调控子共同参与组成ClassⅢPI3复合物调控自噬。
GTP结合的G蛋白亚基Gαi3抑制自噬；GDP结合的Gαi3蛋白活化自噬。
死亡相关蛋白激酶（dath-associatdprotinlinas,DAPK）和DAPK相关蛋白激酶（DAPK-rlatdprotinkinas-1,DRP-1）诱导自噬。
自噬体的观察与自噬相关蛋白的研究
自噬体的观察
直接法：直接在透射电镜下观察自噬不同阶段的形态变化
①初期，主要特征是成新月状，单层或多层膜
②中期：双层或多层的液泡状结构即自噬体结构，内含胞浆成分，如线粒体、内质网等
③后期：形成自噬溶酶体，单层膜，胞浆成分已降解。
间接法：
①RFP-GFP-LC3双荧光标记
当自噬体与溶酶体未发生融合时，RFP荧光和GFP荧光都是存在的，当自噬体与溶酶体发生融合时，导致GFP淬灭，此时只能观察到红色荧光。
②GFP-LC3单荧光标记
自噬形成时，GFP-LC3融合蛋白转移到自噬体膜上，在荧光显微镜下可以看到多个绿色斑点，一个斑点可看成是一个自噬体，可通过计数确定自噬活性的高低。
③MDC染色
MDC是一种嗜酸性的荧光色素，由于能使所有的酸性泡着色，非特异性染色。
自噬相关蛋白的研究
通过WstrnBlot检测LC3II/I，p62，Bclin-1，ULK1蛋白的表达量
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