1、培养室实验准备工作大致同细胞传代培养的前6个步骤。简言之：用紫外消毒等消毒超净工作台面；清洗消毒手部；观察细胞；预热培养用液；点燃酒精灯；取出巴斯德吸管、刻度吸管等插在无菌试管内。
2、冻存液的配置：按如下比例配置：10%甘油+90%培养基，或者10%DMSO+90%培养基。用于配制冻存液的培养基中小牛血清浓度适量提高至20%或更高。所用的甘油需事先高压灭菌，如使用DMSO，则不需要任何灭菌措施。
3、取待冻存的细胞用胰蛋白酶消化（方法见细胞的传代部分）。用含血清的培养基将细胞冲洗下来，将细胞悬液吸到无菌离心管中，r/min离心5min，弃上清，收集细胞沉淀。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。
4、在沉淀中加入适量冻存液制成细胞悬液，细胞浓度宜大，万/mL左右，一般一个中方瓶中的细胞浓缩至1mL，冻存液中为宜。
5、细胞悬液装入冻存管中。用封口膜封裹瓶口，做好标记。
6、冻存管在4℃下存放30min，转放-20℃中30min，再转入-70℃过夜，之后即可放入液氮中长久保存，注意进行登记。
