作为细胞生物学专业的博士生,在基因功能研究上已经有五年的经验了,今天我给大家讲讲其中经常用到并且非常重要的一种技术--慢病毒包装的过表达体系。下面我就从引物设计,慢病毒表达质粒构建等方面详细讲述。
下面以plex-MCS载体为例。
1.选择酶切位点,为了避免移码突变,上游的酶切位点选择起始密码子ATG前面的spel,下游选择xho1。
2.构建方法的选择。
?连接法
对于连接法,首先设计引物将目的基因PCR出来,即酶切位点加基因引物,此时应注意,为了防止酶切将基因破坏,通常习惯在两端加入保护碱基。
保护碱基的查找见到哪家白癜风治疗好治疗白癜风什么外用药好