一、慢病毒简介
慢病毒载体（Lentiviralvector）是在人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）基础上改造而成的，能利用逆转录酶和整合酶，将自身的RNA转变为DNA整合到宿主细胞的染色体中，从而使目的基因在宿主细胞中长期而稳定的表达。具有可用于瞬时或稳定表达的优点，可感染分裂期和间期的细胞，且对于较难转染的多种细胞如神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞、非分化细胞等，均能极大提高目的基因的转导效率，具有广阔的应用前景。
二、慢病毒包装流程
三、慢病毒感染目的细胞（摸索细胞的最适MOI）
接种细胞
用含10%胎牛血清的培养液配成单个细胞悬液，以每孔合适的细胞数量接种到24孔板。
准备病毒
按照MOI计算好的慢病毒稀释到培养基中，使获得的含有慢病毒的培养基总体积为最小体积。
设置目的细胞的MOI，计算病毒使用量：
慢病毒量（mL）=目的细胞数×MOI值/慢病毒滴度（TU/mL）
注：每个滴度可设置3个复孔。
感染细胞
在目的细胞中加入病毒液，同一般培养条件，可根据试验目的和要求决定培养时间。
换液
感染8-12小时后将含有慢病毒的培养液更换成正常培养液。
观察荧光
慢病毒感染3-4天后，观察荧光，记录结果，找出最适合目的细胞的MOI值。
四、药筛浓度优化
接种细胞
24孔板内以5-8×cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。
加药
待细胞生长至70~80%融合度时，分别加入puromycin至终浓度为0.5μg/mL，1μg/mL，2μg/mL，4μg/mL，6μg/mL，8μg/mL（浓度范围在0-15μg/mL，至少5个梯度）。
药物浓度筛选
处理48小时后细胞全部死亡的最低药物浓度为后续实验拟用的浓度。
五、实验体系的放大和正式实验
通过细胞感染预实验可以大致知道使用慢病毒感染目的细胞的优化条件，例如需不需要添加polybrene,MOI是多少？正式实验时所用的细胞数目往往比预实验的多，这就会存在一个计算病毒用量的问题。放大的原则是保持MOI不变。
细胞种板的密度跟最终的感染效果有很大的关系，通常感染时细胞的融合度为20-30%，遇到生长较快或较慢的细胞，融合度适当降低或增加，以感染后的细胞3天培养至80%以上密度为宜。
慢病毒载体是一个接近nm大小的颗粒，在溶液上层中的病毒颗粒很少有机会接近细胞。感染时，减少培养基的体积能提高病毒的感染效率。
不同孔板的培养体积及病毒感染时体积见下表：
六、慢病毒感染实例图
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