快速导读
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目前，国际最新指南均强烈推荐肾脏移植患者术后长期使用包含钙调磷酸酶抑制剂(CNI)的免疫抑制方案，其中首推他克莫司。
2血浆中98.8%的他克莫司与血浆蛋白结合。
3他克莫司在全血中的治疗浓度区间为5~20μg/L，在全血的检测限为0.5~1μg/L。
4血药浓度检测方法主要分为三大类：一是色谱法，主要是LC-MS/MS法；二是免疫法...
他克莫司(FK)是从链霉素属分离提取的强效免疫抑制性二十三元环大环内酯类抗生素，口服吸收后，血浆中游离的他克莫司会被转运至T细胞，最终形成他克莫司-他克莫司结合蛋白-Ca2+-钙调蛋白-钙调磷酸酶的五聚物发挥药理作用，产生强大的免疫抑制作用，临床主要用于预防肾脏、肝脏等器官移植术后的排异反应。
目前，国际最新指南均强烈推荐肾脏移植患者术后长期使用包含钙调磷酸酶抑制剂(CNI)的免疫抑制方案，其中首推他克莫司。他克莫司在不同器官移植患者的药动学及药效学有明显个体差异，给临床治疗时的药物剂量调整带来难度，因此选择合适的方法对他克莫司开展TDM，获得精准的血药浓度，显得尤为重要。
他克莫司的体内分布
他克莫司口服后经胃肠道吸收，生物利用度为20%~25%，吸收后呈双相分布，因其可与红细胞广泛结合，红细胞中的他克莫司浓度平均可达血浆浓度的约15倍，比值受红细胞比容、血浆蛋白和他克莫司浓度影响。血浆中98.8%的他克莫司与血浆蛋白结合，主要结合血清白蛋白和α-1-酸性糖蛋白；红细胞内的他克莫司并不与血红蛋白结合，而是与他克莫司结合蛋白(FKBP)结合(主要是FKBP-12)，且红细胞对他克莫司的摄入会因他克莫司浓度的升高而出现饱和。他克莫司在血浆中与血浆蛋白的结合同样存在饱和现象。
他克莫司的高血浆蛋白结合率使得其半衰期长而清除率低，但不同的人群会出现药物体内分布的差异，如妊娠期妇女会因血浆蛋白和红细胞计数降低而出现游离的他克莫司比例升高及他克莫司清除率升高的情况。
代谢
他克莫司的代谢主要依赖肝脏及肠壁内的CYP3A4和CYP3A5，代谢产生至少15种甲基化、羟基化或去甲基化的代谢产物，以13-O-去甲基他克莫司(M-Ⅰ)和15-O-去甲基他克莫司(M-Ⅲ)为主，其中M-Ⅰ的药理活性为他克莫司的10%，而31-O-去甲基他克莫司(M-Ⅱ)虽然活性与他克莫司相似，但体内含量几乎难以检测。
稳定性
目前，临床检测他克莫司浓度的样本主要是全血，血样的稳定性决定了后续检测结果的精确度和准确性。他克莫司全血样本在22℃或4℃可以保存14d，在-20℃可以保存1个月，在-70℃可保存1年；代谢产物M-Ⅰ、M-Ⅱ和M-Ⅲ在室温下可以保存3d，-20℃可以保存1个月，-80℃可保存1年。反复冻融3次并不会大幅度影响定量检测结果，但-80℃保存6个月以上会使样本中的游离他克莫司浓度增加30%。因此，临床检验窗口在收到患者的血样后应及时处理和检测，如需长期保存，应在冷藏30min后再进行冷冻保存。
检测方法
1、全血浓度
因为他克莫司在血浆中和红细胞中与血浆蛋白的结合是非线性的，单纯测红细胞中或者血浆中的他克莫司浓度并不能反映他克莫司的真实浓度，他克莫司的全血浓度更能反映临床事件，因此必须要检测其全血浓度，且检测过程中需要对血样进行破红细胞处理。
2、方法介绍
他克莫司在全血中的治疗浓度区间为5~20μ/L，在全血的检测限为0.5~1μ/L。研究者在近30年开发出多种他克莫司的血药浓度检测方法(见表1)，主要分为三大类：一是色谱法，主要是LC-MS/MS法；二是免疫法，包括化学发光微粒子免疫检测法、酶放大免疫检测法等；三是基于微采样等新技术的检测法，主要是体积吸收微采样联合液质法等。
▲LC-MS/MS法
LC-MS/MS法是检测免疫抑制药物血药浓度的金标准，此方法有更高的灵敏度和特异性、更低的检测限和定量限，通过检测质荷比(m/z)进行定量。与免疫法相比，LC-MS/MS法更易区分待测物与结构相似的代谢物。DUBBELBOER等成功建立并验证了他克莫司及其代谢物M-Ⅰ、M-Ⅱ和M-Ⅲ的LC-MS/MS定量分析方法，待测血样需要经过蛋白沉淀剂和固相萃取(SPE)处理，因为此方法避免了代谢产物对他克莫司检测的干扰，故检测出来的血药浓度略低于免疫化学法的检测结果。Lee等报道了一种UPLC-MS法，可以同时快速测量全血中的环孢素和他克莫司，适合治疗浓度区间较大的免疫抑制剂。SALLUSTIO等研究表明，在定量检测全血中他克莫司浓度时，与免疫法和常规HPLC法相比，LC-MS/MS法在重复性和精确性方面有显著优势。
▲化学发光微粒子免疫检测法
化学发光微粒子免疫检测(CMIA)法是近十年发展起来的一种免疫分析技术，利用免疫反应的特异性和化学发光的高敏感性，以测量吖啶酯标记物在碱性介质中发生化学反应所产生的光子量为基础，以类磁颗粒作为包被载体。类磁颗粒的作用主要是增加反应的表面积，提高反应灵敏度，缩短反应时间，反应过程中采用磁力吸附分离，冲洗彻底，因而具有更高的特异性。
▲体积吸收微采样联合液质法
体积吸收微采样(VAMS)技术是Neoteryx公司研发的，可以克服血细胞比容对检测结果影响的微创采样技术。患者在家中利用微型取样器采集指尖血，储存在VAMS装置中，送到实验室，应用50%甲醇溶液、0.2和0.5mol/L的硫酸锌甲醇溶液进行萃取，然后经涡旋、声波降解等步骤处理，最后使用LC-MS/MS法进行定量检测。VAMS技术可以让患者在家中就实现血液采集，方便、微创、经济，且储存在VAMS装置中的他克莫司全血样品在43h内稳定可靠。
目前，VAMS技术联合LC-MS/MS法检测他克莫司血药浓度尚不成熟，检测结果的可信度有待进一步研究。
文章来源：曹爱霖,王学彬,王卓,徐宁.他克莫司及其血药浓度检测方法研究进展[J].药学服务与研究,,21(03):-+.
