广州都市报

您现在的位置: 细胞 > 细胞特征 > CRISPRdCasSAMVS过表达慢

CRISPRdCasSAMVS过表达慢

发布时间:2017-12-20 16:33:03   点击数:

经常有人问小编有什么办法能研究基因抑制肿瘤细胞增殖作用,当接触SAM技术之前,小编肯定会不加思索的就告诉他,你就构建带GFP该基因的过表达慢病毒质粒,然后包病毒,转染该肿瘤细胞,仪器扫板计数就ok了;当然今天的我会说还有另外一种技术—那就是CRISPR/dCas-SAM技术。那到底这两种技术谁胜谁汰呢?

CRISPR/dCas-SAM系统与过表达慢病毒质粒系统研究基因对肿瘤细胞增殖实验的大致流程如下图:

两种方法实验流程虽然大致相同,但是在实验过程中都有优缺点,今天小编就来谈谈它们在筛选抑癌基因时会遇到的问题吧!

过表达慢病毒质粒系统研究基因抑制肿瘤细胞增殖实验过程中,优点是:

1.无论基因是不是内源基因,都没有关系;

2.肿瘤细胞中目的基因是否发生缺失、突变,甲基化等都不会影响实验结果;

既然该技术应用可以这么广泛,那是不是它就能成为万能钥匙呢?

过表达慢病毒质粒系统最关键的问题还是在于目的基因CDS序列的获得,以及CDS序列过大怎么办?

通常基因CDS序列的获得是通过抽提RNA,反转录后PCR扩增得到,当然有很多money,也可以直接合成。但是有一个问题是始终解决不了的,那就是当CDS序列过大时,会导致病毒包装失败。当你千辛万苦,花了money,结果是包不了病毒,这个时候你就会。。。

CRISPR/dCas-SAM技术研究基因抑制肿瘤细胞增殖实验过程中,最大的优点是:

基因CDS序列多大都没关系,只要设计的sgRNA合理,一般都是在TSS位置前bp左右设计(启动子内)3-5个sgRNA。可以用在线软件设计







































白癜风专科医院北京
头部白癜风和白癜风的区别


转载请注明:http://www.youlizhouyi.com/xbtz/1768.html

热点文章

  • 没有热点文章

推荐文章

  • 没有推荐文章
网站简介 | 发布优势 | 服务条款 | 隐私保护 | 广告合作 | 合作伙伴 | 版权申明 | 网站地图

当前时间: