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让RNAi易如反掌

发布时间:2017-12-21 16:02:26   点击数:

文章来源:汉恒生物

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象(图1)。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,(长度超过三十的dsRNA会引起干扰素毒性)所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领域。

图1:RNA干扰作用机制示意图。可以发现化学合成的dsRNA与内源性miRNA其实是殊途同归。

如何干扰一个目的基因?

1、对于常规的编码基因,转录出的mRNA基本都是定位在细胞质中。对于这种基因的干扰,可以化学合成dsRNA。dsRNA通常21-25bp,短小精悍,很容易被转染到目的细胞(系)中。通常,为了避免脱靶效应,每个目的基因需要合成3条甚至更多,从而确保至少两条dsRNA效果一致;dsRNA的缺点像优点一样明显:干扰效果不能稳定遗传下去。所以,与之对应的是利用慢(逆转录)病毒病毒载体介导shRNA从而形成稳转系,干扰效果可以持续。

同样地,主流做法是每个基因至少两条shRNA且效果一致。道理明白了,那怎么设计有效的dsRNA或者shRNA吧?请继续往下看:

“君子性非异也,善假于物也”。人之所以为人就是因为善于利用工具(吸血鬼貌似也会使用工具)。Thermo旗下有个BLOCK-iT?RNAiDesigner工具,网址







































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