为了了解附睾上皮细胞的生物学特性,揭示其在生理和病理生理条件下在生殖健康的重要作用,可以利用膜片钳技术研究附睾上皮细胞的单细胞的性质。现在介绍膜片钳技术其中一种方法-全细胞膜片钳记录。
以下是摘自JOVE的关于全细胞膜片钳记录的视频:
操作要点:
1.将移液器用显微操作器的最高速度浸入浴液中。
2.使用数据采集接口命令(例如,“MembraneTest”)快速检查微量移液管阻力(5-10MΩ)。
3.轻轻向下移动安装在显微镜上的物镜;逐渐引导微量移液器朝向选定的细胞。将微量移液管放到焦平面上,直到微量移液器位于选中单元格。
4.使用“移液器偏置”命令,将移液器和浴液之间的液体连接电位消除为零。
5.当微量移液管接近细胞时(由膜测试命令触发时显示电流减少)立即去除低正压,并施加弱负压(0.1mL注射器体积)以形成gigaseal(1GΩ)。
6.用膜试验监测电阻。如果电阻MΩ但1GΩ,施加一个负电位(通常为保持电位设置为-60mV),这可以帮助形成gigaseal。
7.在成功完成全细胞记录配置后,立即应用10mV超极化步骤,以最少时间扫描5次,保持-60mV电位。
参考文献
Zhang,B.L.,Gao,D.Y.,Zhang,X.X.,Shi,S.,Shum,W.Whole-cellPatch-clampRecordingsofIsolatedPrimaryEpithelialCellsfromtheEpididymis.J.Vis.Exp.(),e,doi:10./().
赞赏
人赞赏