6.3悬浮培养生产线对场地和公用工程的要求悬浮培养生产车间与传统的疫苗生产车间一些基本需求一致，如厂房、设备和设施应符合GMP中的相应要求：合适的环境、足够的场地（面积和高度）、合理的布局（建立洁净车间或者负压区）、完善的公用系统及工艺管路，以及经过验证的设备、仪器及仪表等；基本要求如下：6.3.1通用环境及场地条件通常较大型号的生物反应器其罐体重量的支撑在几个支撑点上，并且其属于压力容器，为保证罐体的安全性（防变形等）对车间地面的要求平整度±2mm/m2，并且其承受压力≥㎏。随着反应器规模的不同，其高度有较大的变化，对于场地的面积及高度也有一定的要求，例如1条L-L生产线的占地面积分别是10m2和15m2，层高：2.7~3m；随着反应器体积的增大，其高度增加，配备的要求也相应提高。此外，不同区域及不同季节，外界环境温度可能有一定的变化，按照GMP的要求温度及湿度要求即可满足，但是如果在反应器的安装调试时间，为确保使用厂家对反应器功能的正常检验，通常对环境也有一个最低要求：温度为0℃~45℃，湿度为10%~95%，不冷凝。6.3.2现场硬件配置要求悬浮培养动物细胞的车间，为提高生产效率，保证产品实现管道化、自动化生产，在生产区的布局中，需要配备培养基配液罐、培养基储罐、病毒收获液储存罐等辅助设施，及相应的工艺管道的标准化，并且不同疫苗产品的工艺要求进行配置的个数、规模不同，根据实际需合理布局。对于水、汽、气的管路要求，其基本要求如下：（1）压缩空气管道：要求压缩空气管道必须配备冷干机，并有除油过滤装置。气体压力需保证一个范围，且相应配制减压阀，确保安全性。（2）O2管道及CO2管道：压力≥0.2MPa，同样需配装减压阀等相应装置。并且通常要求O2浓度为99.5%。（3）纯蒸汽管道：纯蒸汽管道为反应器高压灭菌是提供原动力，其压力≥0.4MPa，并配装手动球阀或者手动隔膜阀便于进行调控。（4）工业用水管道如纯化水管道、注射用水管道、工艺冷水（进）管道、工艺冷水（回）管道、自来水管道：应具有一定压力如压力≥0.2MPa，并配制一些调节装置如手动球阀等。（5）排放管道：需耐高压、高温，至少能承受工艺所需的一定压力，且与相邻排放口有一定的距离，避免对反应器罐体内造成污染，同样需配装一些调控装置如手动球阀或者手动隔膜阀等。此外，对于电源还有一定要求，如：V三相五线制，接地良好。此外，对于电网不稳定地区，建议配备稳压器和UPS不间断电源系统，避免在反应器运行过程中出现断电事件。反应器通常配有远程监控，还需安装相应的网线：需根据工控机电脑位置，铺设好连接配电柜与工控机电脑的网线。6.4悬浮培养生产线的建立实例介绍此节具体以设计1条预年产8亿毫升口蹄疫疫苗的反应器生产为例，简单介绍该生产线的建立程序：前提条件：口蹄疫疫苗（O型和亚洲1型），预计年产能8亿毫升。步骤一：选择合适的宿主细胞，对于口蹄疫疫苗产业化的成熟宿主细胞为BHK21细胞株。步骤二：口蹄疫的生产可采用微载体培养也可采用全悬浮培养，相比全悬浮工艺简单且生产成本较低，BHK21贴壁细胞的悬浮化具有一定的工艺现实性，选用全悬浮培养工艺。步骤三：培养工艺的选择。口蹄疫属于裂解病毒，且病变时间较快，可采用批培养/分批换液培养（接毒后更换为维持液），操作简单易控。步骤四：确定生产线上反应器规模和生产线数量，根据预计的年产能8亿毫升，结合市场调研或中试试验，初步估算需要的生产线数量。如采用一条10L-L-L（2台）生产线，反应器表示为工作体积，其中1台L（工作体积L）的反应器培养的种子细胞能够满足2台L（工作体积为L）的接种量，生产的病毒配苗倍数按照5倍计算，其具体产率如下表6-1显示。
表6-1L反应器生产口蹄疫病毒的产能预估
单位
估算
批生产时间
天
7
每批FMDV量
万毫升
年生产时间
天
年生产批次
-
43
年生产FMDV量
万毫升
悬浮工艺病毒配苗倍数
-~
5
年疫苗产量
万毫升
车间疫苗生产线以及年疫苗生产能力：生产FMDV-O型的车间：1条生产线，年产2.1亿毫升。生产FMDV-Asia1型的车间：1条生产线，年产2.1亿毫升。两条生产线全年生产，年产口蹄疫二价疫苗约8.4亿毫升，满足预定目标。步骤五：根据生产线的数量及生产工艺，预计L悬浮培养工艺中涉及的培养基加液管、PBS加液管、消泡管道、补碱管道、细胞收获管等多种工艺管道。步骤六：建立成熟的悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒的工艺（批培养），选用相应的培养液，如BHK21细胞低血清悬浮培养基，采用接种口蹄疫病毒时更换不含血清的维持液；如选用BHK21细胞无血清悬浮培养基，接种口蹄疫病毒无需换液。制定相应的操作规程，生产工艺严格执行GMP，确保工艺的稳定性。步骤七：进行场地和公用工程的建设。根据需要，建立洁净车间和两个病毒负压生产车间，车间的场地和公用工程设置满足反应器本身的需求，按照车间布局配制相应的配液罐、培养基储罐、及相应的工艺管路等。
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