关于近期制备慢病毒载体建立细胞系实验的一些思考
声明：文中所提实验问题涉及到的研究生，我希望你们能够理解我们的初衷：我们对事不对人，我们诚邀大家一起学习，共同进步。
前几天，杨老师发现建立的贾涵和Niaz的慢病毒感染细胞系药物筛选24小时后，细胞几乎全部死亡。这种现象比较奇怪，因为许久没有出现过这种情况了。慢病毒感染细胞后，经药物筛选细胞会死亡一部分。毕竟慢病毒并不能%感染细胞。通常情况下，经过7~8天药物筛选后，细胞系基本已经筛选稳定。
我们首先分析：是不是药物加错了。不同的抗性基因对应不同的筛选药物。经过杨老师确认以后，筛选药物并没有加错。
那么，是不是包装慢病毒的两个辅助质粒有问题呢？MX质粒是之前用过的，这个质粒可以保证没有问题。MX质粒是新近提取的。那么有没有可能是MX质粒有问题呢？我们打算验证一下MX质粒是否有问题。
由于T细胞还没有生长好，验证MX质粒的实验并没有很快就做。后来，小凤将她的要建立慢病毒的质粒送到细胞室。她准备了自己提取的MX和MX质粒。我们选择信任小凤的质粒没有问题。我们准备了6小盘T细胞，用小凤提取的MX和MX辅助质粒包装了三个病毒：小凤的一个，贾涵的一个和Niaz的一个。
转染48小时后，杨老师收集转染的T细胞的培养基（之所以选择转染48小时后的培养基上清，是因为王东阳老师以前做实验检测过慢病毒质粒转染T细胞48小时后的培养基中含有的慢病毒浓度最高）。将收集的病毒培养基经0.45微米微孔过滤器过滤除去残余的T细胞后分别感染指定细胞系。感染48小时后加药物筛选。药物筛选24小时后，杨老师发现：小凤的细胞系没有问题。虽经药物筛选，仍有大部分细胞存活。而贾涵和Niaz的细胞系再次几乎全部死亡。
因此，我们可以确定：不是慢病毒辅助质粒有问题，而是他们的慢病毒穿梭质粒有问题。
今天，杨老师得知：原来Niaz的三个慢病毒穿梭质粒上并没有携带筛选基因，仅仅携带eGFP报告基因。朱贺向杨老师道歉，说她之前没有往这方面多想。但是，我们不认为朱贺有什么需要道歉的地方。这毕竟不是她的课题，她不能也不应事事亲为。我们建议Niaz同学对自己的实验多花些心思。别人可以帮助你，但不要让自己养成事事依赖别人的习惯。依赖别人不但给别人带来许多麻烦，而且阻碍自己的发展。贾涵的质粒是在其他研究生构建的质粒载体的基础上构建的他自己的质粒。因此不太确定这个质粒是否有问题。他需要送这个质粒载体测序，检验这个质粒载体是否如他所需。
基因治疗研究室至今已经成立11年了，实验室构建的质粒载体早已成千上万。为了方便使用，每一个质粒载体都被编写一个序号：比如SB1、SH1等。每一个质粒载体都携带不同的信息，它们不仅仅是一个编号。那些用量比较大的质粒，经过多次重提，它的编号距离它第一次的编号愈来愈远。因此，当看到一个质粒编号时，由于重提的次数太多，因此不能记住这个质粒到底携带了什么信息，是一个什么样的载体。
所以，当使用一个之前从来没有用过的质粒时，详细地了解这个质粒载体的信息，追本溯源，确认这个质粒载体就是你要用的载体十分必要。
每一次实验都是一次探索，这期间或曲折或顺利，最重要的是要学会深入思考，从过往的经历中总结经验，更好地展开后续的工作。
谨祝诸位研究生实验顺利！
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