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利用胶原膜支架建立树突状细胞角质细胞和

发布时间:2017-8-25 14:27:07   点击数:

近年来,人们利用树突状细胞研究免疫敏感性化合物的过敏性。多数的相关研究采用单一细胞培养的模型,相关结果显示只有为数不多的可致敏的化合物能在单一细胞培养模型上反映出致敏性,且对于那些不可溶于水的化合物,无法用单一细胞培养模型进行致敏性检测。也已经有检测不可溶于水的化合物相关的皮肤模型被建立,但其中的缺陷在于模型中没有免疫源性细胞(如树突状细胞),从而不能检测化合物的致敏相关的参数。

来自日本的一个研究团队之前建立了一种有树突状细胞、角质细胞和成纤维细胞组成的3D皮肤模型——KDF皮肤。KDF皮肤可以表达CD86,并释放相关的细胞因子,已经可以利用其检测致敏物质和不致敏物质。但该模型仍有一些缺陷,比如:建立该模型需要的培养时间较长(约3周);需要大量的成纤维细胞以生成足够的胶原;生成的角质层厚度薄于真实皮肤的角质层。该团队在KDF皮肤的基础上进一步研究,通过使用胶原膜支架,改善了上述缺陷,建立了升级版的皮肤重建模型VG-KDF皮肤。

图一VG-KDF皮肤

VG-KDF皮肤相较KDF皮肤,其建模时间由三周缩短至两周,需要的成纤维细胞数量是原来的1/4,使用致敏物质DNCB(二硝基氯苯)、DNFB(二硝基氟苯)检测该模型也可获得诱导CD86表达和细胞因子释放的结果。VG-KDF皮肤模型的建立过程大致如下:使用Ⅰ类胶原生成胶原膜(紫外线辐照促进胶原纤维的交联);依次接种NHSF46细胞(人正常皮肤成纤维细胞)、NHDC细胞(人树突状细胞,CD86+)和NHEK(F)细胞(人正常角质细胞)于胶原膜上,至于6孔板中培养;每隔两个小时接种一种细胞,液体条件共培养48小时后置于气-液培养装置中培养13天,角质细胞就已经分化出足够厚度的角质层,该模型可用于检测致敏化合物(见图一)。

综上,VG-KDF皮肤模型制备较简单,检测周期短,不需要使用活体动物,可作为动物实验的替代方法,检测致敏性化合物,为化学物安全性评价提供参考数据。

原文链接:









































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