#大肠杆菌#
前言
耀海生物
经过前两期的菌周刊，小编相信大家对大肠杆菌RED同源重组技术已经有了相对充分的了解，今天作为收尾，我们结合案例就来讲讲在重组敲除领域中感受态细胞的制备。
以耀海生物成功为上海某明星企业提供了重组质粒构建的服务中所用的感受态细胞为例。客户的需求是将目的基因片段连入载体构建成含有目的基因片段的重组质粒并获得相应菌株。为满足客户目的首先需要找到需要的目标基因片段，那么确定目的基因片段呢？这就需要通过含有目标菌株的感受态细胞来与野生菌株进行比较以便确认，由此可见感受态细胞的制备对于整个项目而言是前提，直接关乎整个项目的基础。
那么至关重要的感受态细胞是如何制备出来的呢？为了更好的回答这个问题，首先需要了解一下感受态细胞的起源及原理。
大肠杆菌感受态细胞制备的渊源
目前用于细菌转化的化学方法大部分是建立在Mandel和Higa()的工作基础之上，他们开发了一种用λ噬菌体DNA转染大肠杆菌的方法。后来，相同的方法被用于将质粒DNA(Cohenetal.)和大肠杆菌染色体DNA(OishiandCosloy)转化到细菌的实验中。
在年两位生物学家MortonMandel和AkikoHiga发现大肠杆菌细胞经CaCI2溶液处理时能够吸收入噬菌体DNA，细胞这种能够吸收DNA的状态便被称感受态。使用理化方法诱导细胞，改变细胞膜状态，增强细胞膜的通透性，细胞膜表面性状发生暂时性改变，方便外源基因或者载体进入受体细胞，这种处于最适合摄取和容纳外来DNA状态的细胞被称为感受态细胞(
